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农杆菌介导高梁转化体系的建立与Bt(Bacillus thuringiensis)抗虫基因的导入

摘要(中文)第11-13页
摘要(英文)第13页
第一章 文献综述第15-45页
    1. 农杆菌介导单子叶植物遗传转化研究进展第15-24页
        1.1 农杆菌介导遗传转化系统的特点第15-16页
        1.2 根癌农杆菌介导的遗传转化机理第16-18页
        1.3 根癌农杆菌介导的单子叶植物遗传转化第18页
        1.4 农杆菌介导单子叶植物遗传转化的影响因素第18-22页
        1.5 问题与展望第22-24页
    2. 高粱组织培养与遗传转化研究进展第24-34页
        2.1 高粱组织培养研究进展第24-29页
        2.2 高粱遗传转化研究进展第29-34页
            2.2.1 高粱遗传转化体系的研究现状第29-30页
            2.2.2 外源基因的导入方法、特点及其影响因素第30-34页
    3. Bt基因及其在转基因抗虫植物中的研究和应用进展第34-42页
        3.1 Bt基因及其一般特性第35-37页
            3.1.1 Bt杀虫晶体蛋白的分子结构、功能及其杀虫机理第35-36页
            3.1.2 Bt杀虫晶体蛋白基因的分类第36-37页
        3.2 Bt基因在转基因抗虫植物中的应用第37-40页
            3.2.1 转Bt基因植物的培育及商品化应用第37-38页
            3.2.2 转Bt基因植物的应用前景第38-40页
        3.3 转Bt基因植物在应用中存在的问题及其对策第40-42页
            3.3.1 Bt基因沉默现象的发生及其对策第40页
            3.3.2 转Bt基因植物的性状变异及解决措施第40-41页
            3.3.3 转Bt基因植物的生物安全性问题及对策第41-42页
    4. 本论文的选题依据、研究内容及目的意义第42-45页
        4.1 选题依据第42-43页
        4.2 研究内容第43页
        4.3 研究目的意义第43-45页
第二章 高梁离体再生体系的建立第45-73页
    1. 材料与方法第46-52页
        1.1 试验材料与来源第46页
        1.2 材料的准备第46页
        1.3 培养基第46-51页
            1.3.1 茎尖直接再生出芽培养基的确定和影响因素的研究第46-48页
            1.3.2 种子(胚)愈伤组织诱导和继代培养基的确定第48-49页
            1.3.3 未成熟胚愈伤组织诱导和继代培养基的确定第49-50页
            1.3.4 幼穗愈伤组织诱导和继代培养基的确定第50-51页
            1.3.5 愈伤组织分化和生根培养基第51页
        1.4 培养条件第51-52页
    2 结果与分析第52-68页
        2.1 茎尖直接再生培养基的正交试验结果及影响因素第52-56页
            2.1.1 植物生长调节物质的正交试验结果第52页
            2.1.2 培养基附加成分的正交试验结果第52-53页
            2.1.3 影响高粱茎尖直接再生的主要因素第53-56页
        2.2 种子(胚)愈伤组织诱导和继代培养基的研究第56-60页
            2.2.1 种子(胚)愈伤组织诱导培养基的正交试验结果第56页
            2.2.2 影响种子(胚)愈伤组织诱导的主要因素第56-58页
            2.2.3 种子(胚)愈伤组织继代培养的主要影响因素第58-60页
        2.3 未成熟胚愈伤组织诱导和继代培养基的研究第60-63页
            2.3.1 未成熟胚愈伤组织诱导培养基的正交试验结果及主要影响因素第60-62页
            2.3.2 未成熟胚愈伤组织继代培养的主要影响因素第62-63页
        2.4 影响幼穗愈伤组织诱导和继代培养的主要因素第63-68页
            2.4.1 培养基第63-66页
            2.4.2 幼穗不同发育时期第66页
            2.4.3 基因型第66-68页
        2.5 高粱愈伤组织再生能力反应第68页
            2.5.1 不同来源外植体诱导的愈伤组织再生能力第68页
            2.5.2 不同基因型愈伤组织的再生能力第68页
    3. 讨论第68-73页
        3.1 高粱茎尖直接再生体系的建立及其主要影响因素第68-70页
        3.2 影响高粱愈伤组织诱导和继代培养的主要因素第70-72页
        3.3 不同来源愈伤组织胚性及再生能力比较第72-73页
第三章 农杆菌介导高粱遗传转化体系的研究第73-98页
    1. 材料与方法第74-79页
        1.1 试验材料与来源第74页
            1.1.1 植物材料与来源第74页
            1.1.2 农杆菌菌株与质粒第74页
            1.1.3 抗生素、选择试剂及其浓度设置第74页
        1.2 方法第74-77页
            1.2.1 植物组织培养方法第74-75页
            1.2.2 抗生素的抑菌试验第75页
            1.2.3 植物组织对选择试剂的本底耐受性检测第75页
            1.2.4 农杆菌的培养与转化方法的比较试验第75-76页
            1.2.5 转化体的筛选与再生第76页
            1.2.6 GUS组织化学染色法第76-77页
        1.3 培养基第77-79页
            1.3.1 农杆菌培养基第77页
            1.3.2 外植体预培养基第77-78页
            1.3.3 共培养基第78页
            1.3.4 筛选培养基第78页
            1.3.5 分化培养基第78-79页
            1.3.6 生根培养基第79页
    2. 结果与分析第79-95页
        2.1 抗生素对农杆菌的抑菌效果和对高粱离体培养的影响第79-83页
            2.1.1 抗生素对农杆菌的抑菌作用第79-80页
            2.1.2 抗生素对高粱茎尖再生和未成熟胚及幼穗愈伤组织诱导的影响第80-81页
            2.1.3 抗生素对高粱愈伤组织生长和分化的影响第81页
            2.1.4 高粱外植体对卡那霉素、潮霉素的不同反应第81-83页
        2.2 几种因子对农杆菌介导高粱茎尖转化频率的影响第83-84页
        2.3 农杆菌介导高粱未成熟胚转化的影响因素第84-90页
        2.4 农杆菌介导幼穗愈伤组织转化体系的研究第90-95页
    3. 讨论第95-98页
        3.1 抗生素的抑菌效果和对高粱离体再生培养的影响第95页
        3.2 高梁外植体对选择标记的本底耐受性反应第95-96页
        3.3 影响农杆菌介导高粱茎尖转化的主要因素第96页
        3.4 影响农杆菌介导高粱未成熟胚和幼穗愈伤组织转化的主要因素第96-98页
第四章 Bt抗虫基因的导入与转基因植株的鉴定第98-119页
    1. 材料与方法第99-107页
        1.1 试验材料与准备第99页
        1.2 农杆菌菌株与质粒第99页
        1.3 方法第99-107页
            1.3.1 农杆菌介导高粱愈伤组织(幼穗)的转化方法和转化体的筛选与再生第99-101页
            1.3.2 GUS组织化学染色法第101-102页
            1.3.3 高粱DNA提取第102页
            1.3.4 PCR检测第102-103页
            1.3.5 cry1Ab基因表达产物的定量测定第103-104页
            1.3.6 Southern杂交第104-107页
            1.3.7 室内抗虫性离体叶片鉴定第107页
    2. 结果与分析第107-116页
        2.1 转化技术的优化和转cry1Ab基因高粱植株的获得第107-110页
            2.1.1 筛选策略对转化效率的影响第107-108页
            2.1.2 分化培养基对抗性愈伤组织再生出苗的影响第108-109页
            2.1.3 转cry1Ab基因高粱植株的获得第109-110页
        2.2 转基因高粱植株中的GUS活性分析第110页
        2.3 转基因高粱植株中cry1Ab基因的PCR分析第110-113页
        2.4 转基因高粱植株Southern blotting检测分析第113页
        2.5 转基因高粱植株中Bt蛋白测定结果第113-115页
            2.5.1 转基因高粱植株叶片中Bt蛋白含量的检测第113页
            2.5.2 转基因高粱植株不同组织中Bt蛋白含量的检测第113-115页
        2.6 室内离体抗虫性生物测定结果第115-116页
    3. 讨论第116-119页
参考文献第119-127页

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