| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 引言 | 第7-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第8-24页 |
| 第1章 肿瘤坏死因子(TNF-α)研究进展 | 第9-20页 |
| 1.1 肿瘤坏死因子(TNF-α)的生理生化性质 | 第9页 |
| 1.2 肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达分布 | 第9-10页 |
| 1.3 肿瘤坏死因子(TNF-α)受体及其信号通路 | 第10-14页 |
| 1.3.1 TNFR1信号通路 | 第11-12页 |
| 1.3.2 TNFR2信号通路 | 第12-14页 |
| 1.4 肿瘤坏死因子(TNF-α)的生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.4.1 细胞毒活性 | 第14页 |
| 1.4.2 宿主防御功能 | 第14-15页 |
| 1.4.3 恶液质效应 | 第15页 |
| 1.4.4 激活内皮细胞 | 第15页 |
| 1.4.5 促使B细胞增殖及免疫球蛋白的产生 | 第15页 |
| 1.4.6 T细胞胸腺细胞活化作用 | 第15-16页 |
| 1.4.7 自然杀伤细胞的激活作用 | 第16页 |
| 1.4.8 脂肪细胞的分化 | 第16页 |
| 1.4.9 TNF-α与心脏疾病 | 第16页 |
| 1.4.10 TNF-α在卵巢中的作用 | 第16页 |
| 1.5 肿瘤坏死因子(TNF-α)抗肿瘤作用机制 | 第16-18页 |
| 1.5.1 与受体结合诱导肿瘤细胞凋亡 | 第16-17页 |
| 1.5.2 作用肿瘤血管内皮细胞,使肿瘤血管功能紊乱 | 第17-18页 |
| 1.5.3 增强宿主的免疫功能 | 第18页 |
| 1.6 结语与展望 | 第18-20页 |
| 第2章 肿瘤坏死因子(TNF-α)突变体研究进展 | 第20-23页 |
| 2.1 TNF-α活性部位 | 第20-21页 |
| 2.2 TNF-α突变体研究 | 第21页 |
| 2.3 结语与展望 | 第21-23页 |
| 第3章 中国家猪养殖现状简介 | 第23-24页 |
| 第二部分 实验部分 | 第24-46页 |
| 第4章 家猪TNF-α突变体基因的构建、表达及活性鉴定 | 第25-46页 |
| 4.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 4.1.1 实验动物、细胞、质粒和宿主菌 | 第25页 |
| 4.1.2 试剂和耗材 | 第25页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第25-26页 |
| 4.2 实验方法 | 第26-36页 |
| 4.2.1 家猪TNF-α基因的克隆 | 第26-28页 |
| 4.2.2 家猪TNF-α野生型表达基因及突变体表达基因的获得 | 第28-30页 |
| 4.2.3 重组表达载体pET28a-PmTNF-α及pET28α-PwTNF-α的构建 | 第30-31页 |
| 4.2.4 重组蛋白体外表达 | 第31-32页 |
| 4.2.5 重组蛋白纯化及Western blot鉴定 | 第32-34页 |
| 4.2.6 质谱分析重组突变体蛋白分子量 | 第34页 |
| 4.2.7 抗肿瘤细胞活性鉴定 | 第34-35页 |
| 4.2.8 酶标法检测TNF-α对L02细胞毒副作用 | 第35-36页 |
| 4.2.9 溶血性分析 | 第36页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第36-44页 |
| 4.3.1 家猪TNF-α基因获得 | 第36页 |
| 4.3.2 家猪TNF-α野生型表达基因及突变体表达基因的获得 | 第36-37页 |
| 4.3.3 重组表达载体pET28α-PmTNF-α及pET28a-PwTNF-α的构建 | 第37-38页 |
| 4.3.4 重组蛋白的表达与纯化 | 第38-39页 |
| 4.3.5 质谱分析重组突变体蛋白分子量 | 第39页 |
| 4.3.6 CCK-8法分析重组家猪TNF-α蛋白对L929细胞毒活性 | 第39-40页 |
| 4.3.7 流式细胞技术分析重组家猪TNF-α蛋白对L929细胞毒活性 | 第40-42页 |
| 4.3.8 酶标法分析重组家猪TNF-α蛋白对L02细胞的毒副作用 | 第42页 |
| 4.3.9 溶血性分析 | 第42-44页 |
| 4.4 讨论 | 第44-46页 |
| 全文总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 附录: 硕士在读期间研究成果 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
