| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-73页 |
| 1.1 微管与微管结合蛋白 | 第14-45页 |
| 1.1.1 微管 | 第14-19页 |
| 1.1.1.1 微管的结构 | 第14-17页 |
| 1.1.1.2 微管的动态不稳定性 | 第17-19页 |
| 1.1.2 微管结合蛋白 | 第19-22页 |
| 1.1.2.1 微管结合蛋白的种类 | 第19页 |
| 1.1.2.2 微管结合蛋白对微管的调节 | 第19-22页 |
| 1.1.3 微管解聚相关蛋白 | 第22-35页 |
| 1.1.3.1 微管解聚蛋白的种类 | 第22-25页 |
| 1.1.3.2 微管解聚蛋白解聚微管的机制 | 第25-30页 |
| 1.1.3.3 微管解聚蛋白的修饰调控 | 第30-32页 |
| 1.1.3.4 微管解聚蛋白的细胞学功能 | 第32-35页 |
| 1.1.4 微管正端跟踪蛋白 | 第35-45页 |
| 1.1.4.1 微管正端跟踪蛋白分类 | 第35-37页 |
| 1.1.4.2 微管正端跟踪蛋白的相互作用 | 第37-40页 |
| 1.1.4.3 微管正端跟踪的机制 | 第40-42页 |
| 1.1.4.4 微管正端跟踪蛋白的修饰调控 | 第42页 |
| 1.1.4.5 微管正端跟踪蛋白的细胞学功能 | 第42-45页 |
| 1.1.5 小结与展望 | 第45页 |
| 1.2 细胞迁移 | 第45-54页 |
| 1.2.1 细胞迁移概述 | 第45-46页 |
| 1.2.2 细胞迁移的调控机制 | 第46-50页 |
| 1.2.2.1 细胞的极化 | 第46页 |
| 1.2.2.2 细胞突出形成机制 | 第46-47页 |
| 1.2.2.3 细胞粘着的动态调节 | 第47-48页 |
| 1.2.2.4 细胞迁移的动力学模型 | 第48-50页 |
| 1.2.3 细胞迁移中的微管 | 第50-54页 |
| 1.2.3.1 细胞迁移中微管动态性的调节 | 第50-52页 |
| 1.2.3.2 细胞迁移中微管的作用 | 第52-54页 |
| 1.2.4 小结与展望 | 第54页 |
| 1.3 细胞有丝分裂 | 第54-73页 |
| 1.3.1 有丝分裂概述 | 第54-57页 |
| 1.3.2 动点组装 | 第57-63页 |
| 1.3.2.1 动点的亚显微结构 | 第57-59页 |
| 1.3.2.2. 动点的分子组装 | 第59-63页 |
| 1.3.3 纺锤体的组装 | 第63-66页 |
| 1.3.4 动点-微管的恰当连接 | 第66-72页 |
| 1.3.4.1 动点-微管连接的建立 | 第66-68页 |
| 1.3.4.2 纠错机制和检验点 | 第68-72页 |
| 1.3.5 小结与展望 | 第72-73页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第73-101页 |
| 2.1 实验材料 | 第73-76页 |
| 2.1.1 载体 | 第73页 |
| 2.1.1.1 原核表达载体 | 第73页 |
| 2.1.1.2 真核表达载体 | 第73页 |
| 2.1.2 质粒 | 第73-74页 |
| 2.1.3 细胞株 | 第74页 |
| 2.1.4 试剂 | 第74-76页 |
| 2.2 实验方法 | 第76-101页 |
| 2.2.1 分子克隆 | 第76-81页 |
| 2.2.1.1 PCR | 第76-77页 |
| 2.2.1.2 琼脂糖凝胶电泳和DNA回收 | 第77-78页 |
| 2.2.1.3 DNA酶切 | 第78页 |
| 2.2.1.4 DNA连接反应 | 第78页 |
| 2.2.1.5 质粒转化 | 第78-79页 |
| 2.2.1.6 质粒一般抽提 | 第79页 |
| 2.2.1.7 质粒的Promega试剂盒抽提 | 第79-80页 |
| 2.2.1.8 RbCl法制备感受态细胞 | 第80-81页 |
| 2.2.2 原核系统中融合蛋白的表达和纯化 | 第81-84页 |
| 2.2.2.1 GST融合蛋白质制备 | 第81-82页 |
| 2.2.2.2 His融合蛋白质制备 | 第82-83页 |
| 2.2.2.3 MBP融合蛋白质制备 | 第83-84页 |
| 2.2.3 昆虫系统中融合蛋白的表达和纯化(包括系统的优化) | 第84-88页 |
| 2.2.3.1 CaCl_2法制备DH10BAC感受态 | 第84-85页 |
| 2.2.3.2 转化pFastBac质粒至DH10Bac中 | 第85页 |
| 2.2.3.3 提取重组的Bacmid | 第85-86页 |
| 2.2.3.4 检测重组Bacmid | 第86页 |
| 2.2.3.5 SF9细胞的培养、保种和复苏 | 第86-87页 |
| 2.2.3.6 转染SF9细胞 | 第87页 |
| 2.2.3.7 扩增病毒 | 第87-88页 |
| 2.2.3.8 SF9中大量表达融合蛋白 | 第88页 |
| 2.2.3.9 融合蛋白纯化 | 第88页 |
| 2.2.4 蛋白质-蛋白质相互作用检测 | 第88-91页 |
| 2.2.4.1 Pull down实验 | 第88-89页 |
| 2.2.4.2 免疫共沉淀实验 | 第89页 |
| 2.2.4.3 分子筛 | 第89-90页 |
| 2.2.4.4 免疫印迹实验 | 第90-91页 |
| 2.2.5 动态微管的体外重构及基于全内反射荧光(TIRF)显微术的可视化 | 第91-95页 |
| 2.2.5.1 灌注小室(Flow Chamber)制作 | 第91-92页 |
| 2.2.5.2 组装GMPCPP稳定的微管 | 第92页 |
| 2.2.5.3 体外重构微管正端跟踪蛋白跟踪动态生长的微管末端 | 第92-95页 |
| 2.2.5.4 其他体外微管实验 | 第95页 |
| 2.2.6 蛋白质修饰检验 | 第95-96页 |
| 2.2.6.1 体外乙酰化 | 第95页 |
| 2.2.6.2 体外磷酸化 | 第95页 |
| 2.2.6.3 质谱样品前期准备 | 第95-96页 |
| 2.2.7 细胞学实验 | 第96-99页 |
| 2.2.7.1 细胞培养和冻存条件 | 第96页 |
| 2.2.7.2 磷酸钙法转染293T细胞 | 第96页 |
| 2.2.7.3 脂质体法转染HeLa细胞--转染质粒 | 第96-97页 |
| 2.2.7.4 脂质体法转染HeLa细胞--转染siRNA | 第97页 |
| 2.2.7.5 HeLa细胞同步化方法 | 第97-98页 |
| 2.2.7.6 免疫荧光实验 | 第98-99页 |
| 2.2.7.7 活细胞实时拍摄 | 第99页 |
| 2.2.7.8 细胞迁移实验 | 第99页 |
| 2.2.8 显微镜及相关图像处理软件 | 第99-101页 |
| 第3章 实验结果 | 第101-204页 |
| 3.1 PLK1磷酸化MCAK调控有丝分裂纺锤体可塑性及染色体忠实分离 | 第101-150页 |
| 3.1.1 引言 | 第101-103页 |
| 3.1.2 实验结果 | 第103-145页 |
| 3.1.2.1 PLK1是MCAK的一个新的相互作用蛋白 | 第103-109页 |
| 3.1.2.2 PLK1的激酶结构域与MCAK的颈部及马达结构域结合 | 第109-114页 |
| 3.1.2.3 MCAK是PLK1的一个新的底物 | 第114-119页 |
| 3.1.2.4 PLK1对MCAK的磷酸化上调了其微管解聚活性 | 第119-128页 |
| 3.1.2.5 PLK1对MCAK的精确调控对染色体的忠实分离至关重要 | 第128-134页 |
| 3.1.2.6 PLK1介导的磷酸化调节了MCAK的分子内相互作用 | 第134-139页 |
| 3.1.2.7 PLK1对MCAK Ser715位的磷酸化上调了MCAK的微管解聚活性 | 第139-141页 |
| 3.1.2.8 MCAK Ser715的磷酸化在有丝分裂过程中的时空性 | 第141-145页 |
| 3.1.3 小结与讨论 | 第145-150页 |
| 3.2 微管正端跟踪蛋白DDA3调节微管动态性及细胞定向迁移 | 第150-204页 |
| 3.2.1 引言 | 第150-151页 |
| 3.2.2 实验结果 | 第151-198页 |
| 3.2.2.1 DDA3是一个新的EB1结合蛋白 | 第151-156页 |
| 3.2.2.2 DDA3是一个微管正端跟踪蛋白 | 第156-162页 |
| 3.2.2.3 DDA3依赖于EB 1定位并跟踪正在生长的微管正末端 | 第162-169页 |
| 3.2.2.4 SxlP/SXLP序列是DDA3结合EB1的结构基础 | 第169-175页 |
| 3.2.2.5 DDA3调节细胞皮层附近的微管正末端的动态性 | 第175-184页 |
| 3.2.2.6 DDA3是细胞迁移时方向持续所必需的 | 第184-189页 |
| 3.2.2.7 乙酰化是细胞定向迁移中EB1-DDA3相互作用的潜在调节机制 | 第189-198页 |
| 3.2.3 小结与讨论 | 第198-204页 |
| 参考文献 | 第204-229页 |
| 致谢 | 第229-230页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第230-231页 |
