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HIV-1 Vpr蛋白以非依赖CRL4(DCAF1)泛素连接酶途径抑制CMV启动子活性的研究

前言第4-5页
中文摘要第5-7页
Abstract第7-9页
目录第10-12页
第1章 绪论第12-32页
    1.1 艾滋病与免疫缺陷病毒研究进展第12-15页
    1.2 病毒辅助蛋白 Vpr 研究进展第15-21页
        1.2.1 病毒辅助蛋白第15-16页
        1.2.2 病毒辅助蛋白 Vpr 的功能第16-20页
        1.2.3 CRL4(DCAF1) E3 泛素连接酶降解体系第20-21页
    1.3 HIV 病毒的转录机制第21-23页
    1.4 巨细胞病毒及其启动子介绍第23-28页
        1.4.1 巨细胞病毒简介第23-26页
        1.4.2 巨细胞病毒启动子简介及病毒转录机制第26-28页
    1.5 研究设计第28-32页
第2章 材料与方法第32-44页
    2.1 材料与常规试剂第32-35页
        2.1.1 菌株与质粒第32-33页
        2.1.2 细胞第33页
        2.1.3 抗体第33页
        2.1.4 相关试剂第33-35页
    2.2 仪器与设备第35页
    2.3 方法第35-44页
        2.3.1 定点突变 PCR第35-36页
        2.3.2 质粒构建第36-37页
        2.3.3 转化第37页
        2.3.4 质粒大提(试剂盒法)第37-38页
        2.3.5 流式细胞术检测细胞周期(G2)阻滞(以 6 孔板为例)第38页
        2.3.6 免疫共沉淀(磁珠标签为 HA)第38-39页
        2.3.7 TRIZOL 法提取 RNA(以 6 孔板为例,全部冰上操作)第39页
        2.3.8 反转录 PCR第39页
        2.3.9 实时定量 PCR第39-40页
        2.3.10 细胞培养及外源基因转染(以 12 孔板为例)第40页
        2.3.11 双荧光素酶检测第40-41页
        2.3.12 构建稳定细胞系第41页
        2.3.13 蛋白免疫印迹检测第41-42页
        2.3.14 数据处理软件第42-44页
第3章 结果与讨论第44-76页
    3.1 HIV-1 Vpr 蛋白抑制 CMV 启动子的转录活性第44-51页
        3.1.1 Vpr 蛋白抑制 CMV 启动子的转录活性第44-48页
        3.1.2 Vpr 在其他细胞系中保持对 CMV 启动子的调控能力第48-49页
        3.1.3 Vpr 调控 HIV-1 LTR 的转录活性第49页
        3.1.4 小结与讨论第49-51页
    3.2 HIV-1 Vpr 蛋白调节 CMV 启动子的过程不需要 CRL4(DCAF1)泛素化连接酶第51-57页
        3.2.1 Q65R 保持抑制 CMV 启动子转录活性的功能第51-53页
        3.2.2 Vpr 抑制 CMV 启动子的转录活性不依赖 DCAF1 蛋白第53-55页
        3.2.3 MG132 丧失阻断 Vpr 抑制 CMV 启动子活性的作用第55-56页
        3.2.4 小结与讨论第56-57页
    3.3 A30/V31 是 HIV-1 Vpr 蛋白调节 CMV 启动子的重要区域第57-64页
        3.3.1 不同种属不同亚型 Vpr 的α-螺旋 1 序列比较分析第58-59页
        3.3.2 病毒蛋白 Vprα-螺旋 1 结构对 CMV 启动子转录表达的影响第59-60页
        3.3.3 A30/V31 是 Vpr 调节 CMV-启动子转录活性的重要位点第60-61页
        3.3.4 病毒蛋白 Vpr 空间结构预测研究第61-62页
        3.3.5 A30/V31 是 Vprα-螺旋 1 内重要功能区域第62-63页
        3.3.6 小结与讨论第63-64页
    3.4 Vpr 蛋白在转录水平上调节特定宿主基因启动子的活性第64-71页
        3.4.1 Vpr 特异性调控人内源基因 UNG2 启动子的转录活性第64-66页
        3.4.2 Vpr 对其他人内源基因的转录表达无影响第66-67页
        3.4.3 A30/V31 同样是 Vpr 调节 UNG2 启动子转录活性的重要位点第67-68页
        3.4.4 Vpr 调控启动子转录活性的预测机制第68-71页
        3.4.5 小结与讨论第71页
    3.5 HIV-1 Vpr 调节 CMV 启动子转录活性的作用具有种属特异性第71-76页
        3.5.1 不同种属不同亚型 Vpr 的序列比较分析第72页
        3.5.2 HIV-1 Vpr 对 CMV 启动子转录活性的调节作用具有种属特异性第72-74页
        3.5.3 小结第74-76页
第4章 结论第76-78页
参考文献第78-89页
攻读博士学位期间发表的论文及科研成果第89-90页
致谢第90页

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