前言 | 第4-5页 |
中文摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
目录 | 第10-12页 |
第1章 绪论 | 第12-32页 |
1.1 艾滋病与免疫缺陷病毒研究进展 | 第12-15页 |
1.2 病毒辅助蛋白 Vpr 研究进展 | 第15-21页 |
1.2.1 病毒辅助蛋白 | 第15-16页 |
1.2.2 病毒辅助蛋白 Vpr 的功能 | 第16-20页 |
1.2.3 CRL4(DCAF1) E3 泛素连接酶降解体系 | 第20-21页 |
1.3 HIV 病毒的转录机制 | 第21-23页 |
1.4 巨细胞病毒及其启动子介绍 | 第23-28页 |
1.4.1 巨细胞病毒简介 | 第23-26页 |
1.4.2 巨细胞病毒启动子简介及病毒转录机制 | 第26-28页 |
1.5 研究设计 | 第28-32页 |
第2章 材料与方法 | 第32-44页 |
2.1 材料与常规试剂 | 第32-35页 |
2.1.1 菌株与质粒 | 第32-33页 |
2.1.2 细胞 | 第33页 |
2.1.3 抗体 | 第33页 |
2.1.4 相关试剂 | 第33-35页 |
2.2 仪器与设备 | 第35页 |
2.3 方法 | 第35-44页 |
2.3.1 定点突变 PCR | 第35-36页 |
2.3.2 质粒构建 | 第36-37页 |
2.3.3 转化 | 第37页 |
2.3.4 质粒大提(试剂盒法) | 第37-38页 |
2.3.5 流式细胞术检测细胞周期(G2)阻滞(以 6 孔板为例) | 第38页 |
2.3.6 免疫共沉淀(磁珠标签为 HA) | 第38-39页 |
2.3.7 TRIZOL 法提取 RNA(以 6 孔板为例,全部冰上操作) | 第39页 |
2.3.8 反转录 PCR | 第39页 |
2.3.9 实时定量 PCR | 第39-40页 |
2.3.10 细胞培养及外源基因转染(以 12 孔板为例) | 第40页 |
2.3.11 双荧光素酶检测 | 第40-41页 |
2.3.12 构建稳定细胞系 | 第41页 |
2.3.13 蛋白免疫印迹检测 | 第41-42页 |
2.3.14 数据处理软件 | 第42-44页 |
第3章 结果与讨论 | 第44-76页 |
3.1 HIV-1 Vpr 蛋白抑制 CMV 启动子的转录活性 | 第44-51页 |
3.1.1 Vpr 蛋白抑制 CMV 启动子的转录活性 | 第44-48页 |
3.1.2 Vpr 在其他细胞系中保持对 CMV 启动子的调控能力 | 第48-49页 |
3.1.3 Vpr 调控 HIV-1 LTR 的转录活性 | 第49页 |
3.1.4 小结与讨论 | 第49-51页 |
3.2 HIV-1 Vpr 蛋白调节 CMV 启动子的过程不需要 CRL4(DCAF1)泛素化连接酶 | 第51-57页 |
3.2.1 Q65R 保持抑制 CMV 启动子转录活性的功能 | 第51-53页 |
3.2.2 Vpr 抑制 CMV 启动子的转录活性不依赖 DCAF1 蛋白 | 第53-55页 |
3.2.3 MG132 丧失阻断 Vpr 抑制 CMV 启动子活性的作用 | 第55-56页 |
3.2.4 小结与讨论 | 第56-57页 |
3.3 A30/V31 是 HIV-1 Vpr 蛋白调节 CMV 启动子的重要区域 | 第57-64页 |
3.3.1 不同种属不同亚型 Vpr 的α-螺旋 1 序列比较分析 | 第58-59页 |
3.3.2 病毒蛋白 Vprα-螺旋 1 结构对 CMV 启动子转录表达的影响 | 第59-60页 |
3.3.3 A30/V31 是 Vpr 调节 CMV-启动子转录活性的重要位点 | 第60-61页 |
3.3.4 病毒蛋白 Vpr 空间结构预测研究 | 第61-62页 |
3.3.5 A30/V31 是 Vprα-螺旋 1 内重要功能区域 | 第62-63页 |
3.3.6 小结与讨论 | 第63-64页 |
3.4 Vpr 蛋白在转录水平上调节特定宿主基因启动子的活性 | 第64-71页 |
3.4.1 Vpr 特异性调控人内源基因 UNG2 启动子的转录活性 | 第64-66页 |
3.4.2 Vpr 对其他人内源基因的转录表达无影响 | 第66-67页 |
3.4.3 A30/V31 同样是 Vpr 调节 UNG2 启动子转录活性的重要位点 | 第67-68页 |
3.4.4 Vpr 调控启动子转录活性的预测机制 | 第68-71页 |
3.4.5 小结与讨论 | 第71页 |
3.5 HIV-1 Vpr 调节 CMV 启动子转录活性的作用具有种属特异性 | 第71-76页 |
3.5.1 不同种属不同亚型 Vpr 的序列比较分析 | 第72页 |
3.5.2 HIV-1 Vpr 对 CMV 启动子转录活性的调节作用具有种属特异性 | 第72-74页 |
3.5.3 小结 | 第74-76页 |
第4章 结论 | 第76-78页 |
参考文献 | 第78-89页 |
攻读博士学位期间发表的论文及科研成果 | 第89-90页 |
致谢 | 第90页 |