| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 引言 | 第9-19页 |
| 1.1 木聚糖的分类及结构 | 第10页 |
| 1.2 木聚糖酶 | 第10-18页 |
| 1.2.1 木聚糖酶的分类 | 第11-12页 |
| 1.2.2 木聚糖酶的特性 | 第12-13页 |
| 1.2.3 木聚糖酶分子结构区域 | 第13-14页 |
| 1.2.4 木聚糖酶的催化机制 | 第14-15页 |
| 1.2.5 木聚糖酶的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.6 木聚糖酶的生产 | 第16-17页 |
| 1.2.7 木聚糖酶的分子克隆及基因工程 | 第17-18页 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统 | 第18页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-27页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 培养基 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂与溶液 | 第19-21页 |
| 2.1.3.1 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3.2 溶液 | 第19-21页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 包含黏琼脂芽孢杆菌木聚糖酶基因的克隆与序列分析 | 第22-24页 |
| 2.2.1.1 包含黏琼脂芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.1.2 PCR扩增目的片段 | 第22-23页 |
| 2.2.1.3 克隆和测序 | 第23-24页 |
| 2.2.2 木聚糖酶基因在BL21中的表达 | 第24-25页 |
| 2.2.2.1 重组菌的构建 | 第24页 |
| 2.2.2.2 重组菌株的诱导表达 | 第24-25页 |
| 2.2.2.3 重组酶的分离纯化 | 第25页 |
| 2.2.3 表达产物的酶活性测定 | 第25-26页 |
| 2.2.4 重组酶在E.coli BL21中表达条件的优化 | 第26页 |
| 2.2.4.1 培养温度的确定 | 第26页 |
| 2.2.4.2 培养时间的确定 | 第26页 |
| 2.2.4.3 培养基对重组酶表达的影响 | 第26页 |
| 2.2.4.4 IPTG浓度对重组酶表达的影响 | 第26页 |
| 2.2.4.5 甘氨酸、甘露醇、吐温-80、吐温-20和Triton-100对酶表达的影响 | 第26页 |
| 2.2.5 重组酶在E.coli BL21中自诱导的表达 | 第26-27页 |
| 2.2.5.1 乳糖浓度对重组酶表达的影响 | 第26-27页 |
| 2.2.5.2 葡萄糖浓度对重组酶表达的影响 | 第27页 |
| 2.2.6 木聚糖酶的酶学性质研究 | 第27页 |
| 2.2.6.1 木聚糖酶的最适pH | 第27页 |
| 2.2.6.2 木聚糖酶的最适温度 | 第27页 |
| 2.2.6.3 金属离子对酶活力的影响 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-37页 |
| 3.1 木聚糖酶基因重组菌的构建及序列分析 | 第27-32页 |
| 3.1.1 芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| 3.1.2 木聚糖酶基因的扩增 | 第28页 |
| 3.1.3 阳性菌落的鉴定 | 第28-29页 |
| 3.1.4 DNA测序和生物信息学分析 | 第29-32页 |
| 3.1.4.1 DNA测序 | 第29-30页 |
| 3.1.4.2 信号肽分析 | 第30-31页 |
| 3.1.4.3 保守结构域分析 | 第31页 |
| 3.1.4.4 等电点和分子量的预测 | 第31页 |
| 3.1.4.5 木聚糖酶蛋白二级结构预测 | 第31-32页 |
| 3.2 重组酶在E.coli BL21中的表达条件优化 | 第32-36页 |
| 3.2.1 培养温度的确定 | 第32-33页 |
| 3.2.2 诱导时间的优化 | 第33页 |
| 3.2.3 培养基对重组酶表达的影响 | 第33-34页 |
| 3.2.4 IPTG浓度对重组酶表达的影响 | 第34页 |
| 3.2.5 甘氨酸、甘露醇、吐温-80、吐温-20和Triton-100对酶表达的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.6 重组酶在E.coli BL21中自诱导表达 | 第35-36页 |
| 3.2.6.1 葡萄糖浓度对重组酶表达的影响 | 第35页 |
| 3.2.6.2 乳糖浓度对重组酶表达的影响 | 第35-36页 |
| 3.3 重组蛋白的表达及SDS-PAGE分析 | 第36页 |
| 3.4 木聚糖酶的酶学性质研究 | 第36-37页 |
| 3.4.1 木聚糖酶的最适pH | 第36-37页 |
| 3.4.2 木聚糖酶的最适温度 | 第37页 |
| 3.4.3 金属离子对酶活力的影响 | 第37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 4.1 木聚糖酶基因的克隆表达 | 第37-38页 |
| 4.2 木聚糖酶的酶学性质 | 第38-39页 |
| 5 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
