| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 干细胞及其调控网络 | 第10-12页 |
| 1.1.1 干细胞的特征与研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.2 干细胞多能性核心调控网络 | 第11-12页 |
| 1.2 Prdm14基因研究进展 | 第12-19页 |
| 1.2.1 PRDM家族 | 第12-13页 |
| 1.2.2 Prdm14的分子结构与表达模式 | 第13-15页 |
| 1.2.3 Prdm14与细胞多能性调控网络 | 第15-16页 |
| 1.2.4 Prdm14与表观遗传重编程 | 第16-18页 |
| 1.2.5 Prdm14与生殖细胞特化 | 第18-19页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 第2章 实验研究 | 第21-45页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第21-26页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器及试剂 | 第21-24页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第26-45页 |
| 2.2.1 目的基因扩增及分析 | 第26-29页 |
| 2.2.2 Prdm14蛋白的原核表达及抗体制备 | 第29-33页 |
| 2.2.3 Prdm14基因在组织及胚胎中的表达分析 | 第33-38页 |
| 2.2.4 基因核定位分析 | 第38页 |
| 2.2.5 基因过表达及分析 | 第38-41页 |
| 2.2.6 基因敲除及分析 | 第41-45页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第45-67页 |
| 3.1 目的基因的扩增与序列分析 | 第45-50页 |
| 3.1.1 青鳉Prdm14基因的扩增及验证 | 第45-46页 |
| 3.1.2 Prdm14基因序列分析 | 第46-50页 |
| 3.2 Prdm14蛋白原核表达及抗体制备 | 第50-56页 |
| 3.2.1 真核及原核表达载体的构建与鉴定 | 第50-52页 |
| 3.2.2 蛋白原核表达、纯化及抗体制备 | 第52-53页 |
| 3.2.3 多克隆抗体特异性检测 | 第53页 |
| 3.2.4 多克隆抗体对Prdm14: EGF融合蛋白的检测 | 第53-56页 |
| 3.3 Prdm14在青鳉组织及胚胎中的表达分布 | 第56-61页 |
| 3.3.1 RT-PCR检测青鳉Prdm14在组织中的表达 | 第56页 |
| 3.3.2 各组织中Prdm14蛋白的检测 | 第56页 |
| 3.3.3 性腺中Prdm14的分布 | 第56-58页 |
| 3.3.4 RT-PCR检测Prdm14在胚胎中的表达 | 第58-59页 |
| 3.3.5 qRT-PCR检测胚胎中Prdm14表达量的变化 | 第59页 |
| 3.3.6 Prdm14在各时期胚胎中的分布 | 第59-61页 |
| 3.4 Prdm14在细胞中的定位 | 第61-62页 |
| 3.5 在SG3中过表达Prdm14后对细胞的影响 | 第62-64页 |
| 3.5.1 过表达Prdm14细胞的生长曲线 | 第62-63页 |
| 3.5.2 过表达Prdm14细胞内转录因子表达量变化 | 第63-64页 |
| 3.6 敲除Prdm14后对青鳉胚胎发育的影响 | 第64-67页 |
| 3.6.1 靶位点设计及敲除效率分析 | 第64-65页 |
| 3.6.2 敲除prm14对青鳉胚胎发育的影响 | 第65-67页 |
| 第4章 讨论 | 第67-74页 |
| 4.1 青鳉Prdm14基因的结构特点 | 第67页 |
| 4.2 青鳉Prdm14抗体制备及特异性检测 | 第67-69页 |
| 4.3 青鳉Prdm14基因的时空表达模式 | 第69-71页 |
| 4.4 青鳉Prdm14的细胞核定位 | 第71页 |
| 4.5 过表达Prdm14对SG3细胞的影响 | 第71-72页 |
| 4.6 敲除Prdm14对青鳉胚胎发育的影响 | 第72-74页 |
| 第5章 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
