| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 上篇 文献综述 | 第10-22页 |
| 第一章 植物抗病基因工程研究进展 | 第10-18页 |
| 1 植物抗病基因工程的原理及研究现状 | 第10-11页 |
| ·植物抗病基因工程的原理 | 第10-11页 |
| ·植物抗病基因工程的研究现状 | 第11页 |
| 2 用于植物抗病基因工程的目的基因 | 第11-14页 |
| ·植物抗病基因(R基因) | 第11-12页 |
| ·病原体无毒基因(avr基因) | 第12页 |
| ·植物的防卫反应基因 | 第12-14页 |
| ·病程相关蛋白基因 | 第13页 |
| ·抗菌蛋白基因 | 第13页 |
| ·溶菌酶基因 | 第13-14页 |
| 3 植物遗传转化方法 | 第14-15页 |
| ·根癌土壤杆菌介导的转化法 | 第14页 |
| ·基因枪法 | 第14-15页 |
| 4 转基因植物的安全性评价 | 第15-16页 |
| ·转基因植物的环境安全性 | 第15页 |
| ·转基因植物的食品安全性 | 第15-16页 |
| 5 展望 | 第16-18页 |
| 第二章 植物蛋白激酶研究进展 | 第18-22页 |
| 1 植物蛋白激酶的研究现状 | 第18-19页 |
| 2 植物蛋白激酶的分类及功能 | 第19-20页 |
| 3 展望 | 第20-21页 |
| 本课题的研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 下篇 研究内容 | 第22-64页 |
| 第一章 植物转基因重组载体的构建 | 第22-34页 |
| 1 材料和方法 | 第22-30页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-29页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分析 | 第24页 |
| ·胶回收 | 第24-25页 |
| ·将目的基因连接到pMD18-T载体上 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第26-27页 |
| ·连接产物的转化及转化子的菌落PCR验证 | 第27页 |
| ·质粒提取 | 第27-28页 |
| ·酶切验证 | 第28-29页 |
| ·重组质粒导入土壤杆菌 | 第29-30页 |
| ·土壤杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·土壤杆菌感受态细胞的转化 | 第29页 |
| ·转化子的鉴定 | 第29-30页 |
| 2 结果和分析 | 第30-31页 |
| ·目的基因片段的T-载体克隆 | 第30页 |
| ·重组植物表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-34页 |
| 第二章 转基因烟草的产生和鉴定 | 第34-44页 |
| 1 材料和方法 | 第34-39页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·植物和微生物材料 | 第34页 |
| ·抗生素和生长素 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34-35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-39页 |
| ·转基因烟草的产生 | 第35-36页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第36-37页 |
| ·转基因烟草的GUS染色分析 | 第37页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR检测 | 第37-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-41页 |
| ·转基因烟草的产生 | 第39页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第39-40页 |
| ·转基因烟草的GUS染色分析 | 第40-41页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR检测 | 第41页 |
| 3 讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 转基因烟草的T_1代种子筛选及遗传分析 | 第44-48页 |
| 1 材料与方法 | 第44-45页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-45页 |
| ·T_1代种子的筛选 | 第44-45页 |
| ·T_1代种子的遗传分析 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-47页 |
| ·T_1代种子的筛选 | 第45-46页 |
| ·T_1代种子的遗传分析 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 转基因烟草的抗病性测定 | 第48-60页 |
| 1 材料与方法 | 第48-52页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·植物材料 | 第48页 |
| ·菌株 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·转基因烟草抗TMV分析 | 第49-50页 |
| ·ELISA法检测叶片中的TMV含量 | 第50页 |
| ·转基因烟草接种TMV后的酶活性测定 | 第50-51页 |
| ·转基因烟草抗软腐病分析 | 第51-52页 |
| ·转基因烟草抗烟草青枯病分析 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-57页 |
| ·转基因烟草抗TMV分析 | 第52-56页 |
| ·ELISA法检测叶片中的TMV含量 | 第54-55页 |
| ·转基因烟草接种TMV后的酶活性测定 | 第55-56页 |
| ·转基因烟草抗软腐病分析 | 第56页 |
| ·转基因烟草抗烟草青枯病分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| 附:小麦中类蛋白激酶基因片段TA50-10的同源性分析 | 第60-64页 |
| 1 方法 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 全文总结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 附录一 本文用到的培养基和缓冲液 | 第74-80页 |
| 附录二 缩略语 | 第80-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第82-84页 |
| 本论文研究受资助基金 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86页 |