| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第14-22页 |
| 1.1 细胞凋亡简述 | 第14-17页 |
| 1.1.1 细胞凋亡的概念及特征 | 第14页 |
| 1.1.2 引起细胞凋亡的因素 | 第14-15页 |
| 1.1.3 细胞凋亡相关因子 | 第15-16页 |
| 1.1.4 细胞凋亡的检测方法 | 第16-17页 |
| 1.2 Caspase家族 | 第17-18页 |
| 1.3 细胞凋亡通路 | 第18-19页 |
| 1.3.1 Caspase非依赖性的细胞凋亡通路 | 第18-19页 |
| 1.3.2 死亡受体介导的外源通路 | 第19页 |
| 1.3.3 线粒体介导Caspase依赖的内源性细胞凋亡通路 | 第19页 |
| 1.4 执行Caspase蛋白的特性及作用机理 | 第19-20页 |
| 1.5 鳞翅目昆虫的Caspase分类 | 第20页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 实验材料和方法 | 第22-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-29页 |
| 2.1.1 动物和细胞 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株、载体及病毒 | 第22-23页 |
| 2.1.3 试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 溶液的配置 | 第24-29页 |
| 2.2 主要实验仪器、生产厂家及型号 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-43页 |
| 2.3.1 Sl-caspase-5基因的克隆 | 第30-35页 |
| 2.3.2 质粒的提取 | 第35-36页 |
| 2.3.3 双酶切质粒和PCR胶回收目的片段 | 第36-37页 |
| 2.3.4 重组载体的构成 | 第37-38页 |
| 2.3.5 感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 2.3.6 质粒的转化 | 第39页 |
| 2.3.7 原核表达目的蛋白制备多克隆抗体 | 第39-42页 |
| 2.3.8 原核表达蛋白的酶切实验 | 第42页 |
| 2.3.9 测Sl-caspase-5蛋白酶活性实验 | 第42-43页 |
| 2.4 真核转染细胞实验部分 | 第43-46页 |
| 2.4.1 昆虫细胞斜纹夜蛾的培养 | 第43-44页 |
| 2.4.2 重组真核表达载体的转染 | 第44-46页 |
| 3 实验结果与分析 | 第46-60页 |
| 3.1 Sl-caspase-5的克隆及载体的构建 | 第46-48页 |
| 3.1.1 Sl-caspase-5全长的扩增和原核表达载体PET28-a的构建 | 第46页 |
| 3.1.2 真核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 3.2 Sl-caspase-5的测序 | 第48页 |
| 3.3 Sl-caspase-5序列比对和结构预测 | 第48-51页 |
| 3.3.1 三级结构预测 | 第48-49页 |
| 3.3.2 Sl-caspase-5结构简图 | 第49-50页 |
| 3.3.3 同源比对分析 | 第50-51页 |
| 3.4 Sl-caspase-5原核表达 | 第51-53页 |
| 3.5 Sl-caspase-5点突变及抗体的制备 | 第53-54页 |
| 3.5.1 点突变 | 第53页 |
| 3.5.2 Sl-caspase-5的抗体的制备 | 第53-54页 |
| 3.6 Sl-caspase-5的功能研究 | 第54-60页 |
| 3.6.1 Sl-caspase-5原核表达的酶活性分析 | 第54-56页 |
| 3.6.2 细胞凋亡诱导下Sl-caspase-5过表达对细胞的影响及酶活性分析 | 第56-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
