| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第9-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 1.1 布鲁氏菌 | 第15-18页 |
| 1.1.1 布鲁氏菌病 | 第15页 |
| 1.1.2 布鲁氏菌属 | 第15-16页 |
| 1.1.3 牛种布鲁氏菌 | 第16-17页 |
| 1.1.3.1 疫苗株S19 | 第17页 |
| 1.1.4 羊种布鲁氏菌 | 第17-18页 |
| 1.1.4.1 疫苗株M5 | 第18页 |
| 1.2 布鲁氏菌致病机理 | 第18-20页 |
| 1.3 布鲁氏菌的生存机制 | 第20-21页 |
| 1.4 布鲁氏菌侵入细胞 | 第21-22页 |
| 1.5 布鲁氏菌的胞内运输 | 第22-23页 |
| 1.6 试验动物模型：小鼠 | 第23页 |
| 1.7 研究意义和目的 | 第23-24页 |
| 1.8 技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 GFP基因在布鲁氏菌中的表达及检测 | 第25-34页 |
| 2.1 材料仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.1 材料 | 第25页 |
| 2.1.1.1 载体、菌种 | 第25页 |
| 2.1.1.2 试剂 | 第25页 |
| 2.1.1.3 培养基 | 第25页 |
| 2.1.1.4 试验细胞 | 第25页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-29页 |
| 2.2.1 p MC-221 载体保菌的复活与扩繁 | 第26页 |
| 2.2.1.1 阳性菌的扩繁 | 第26页 |
| 2.2.1.2 p MC-221 转化进入大肠杆菌的质粒提取 | 第26页 |
| 2.2.2 布鲁氏菌S19/M5感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.3 电转化 | 第27页 |
| 2.2.4 S19-GFP和M5-GFP的培养和PCR鉴定 | 第27页 |
| 2.2.5 PBS缓冲液和细胞培养液的配置 | 第27-28页 |
| 2.2.5.1 PBS缓冲液的配置 | 第27页 |
| 2.2.5.2 细胞培养液的配置 | 第27-28页 |
| 2.2.6 小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养 | 第28-29页 |
| 2.2.6.1 小鼠巨噬细胞的复苏 | 第28页 |
| 2.2.6.2 小鼠巨噬细胞培养液的更换 | 第28页 |
| 2.2.6.3 小鼠巨噬细胞的传代 | 第28页 |
| 2.2.6.4 小鼠巨噬细胞的冻存 | 第28页 |
| 2.2.6.5 细胞爬片的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.7 M5、S19和GFP-M5、GFP-S19的培养 | 第29页 |
| 2.2.8 M5、S19和GFP-M5、GFP-S19侵染小鼠巨噬细胞 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-32页 |
| 2.3.1 含有p MC-221 载体的DH5α 菌株在氯霉素抗性LB固体培养基上筛选的结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 扩增GFP基因鉴定阳性克隆菌株 | 第30页 |
| 2.3.3 转化子GFP-M5和GFP-S19在含有氯霉素抗性的布鲁氏菌固体培养基上的筛选结果 | 第30-31页 |
| 2.3.4 扩增GFP基因鉴定GFP-M5和GFP-S19 | 第31页 |
| 2.3.5 M5和S19侵染RAW264.7 的胞内生存能力实验结果 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 GFP-M5和GFP-S19与RAW264.7 细胞溶酶体、内质网、高尔基体的结合特征 | 第34-44页 |
| 3.1 材料仪器 | 第34页 |
| 3.1.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.1.1 菌种 | 第34页 |
| 3.1.1.2 试验细胞 | 第34页 |
| 3.1.2 试剂及仪器 | 第34页 |
| 3.2 方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 小鼠巨噬细胞的培养 | 第34页 |
| 3.2.2 GFP-M5和GFP-S19的培养 | 第34页 |
| 3.2.3 GFP-M5和GFP-S19侵染小鼠巨噬细胞 | 第34-35页 |
| 3.2.4 激光共聚焦试验相关试剂的配制及对溶酶体、内质网和高尔基体的荧光标记 | 第35页 |
| 3.2.4.1 Lyso-Tracker Red工作液的配制及活细胞溶酶体的荧光标记 | 第35页 |
| 3.2.4.2 ER-Tracker Red工作液的配制及活细胞内质网的荧光标记 | 第35页 |
| 3.2.4.3 Golgi-Tracker Red工作液的配制及活细胞高尔基体的荧光标记 | 第35页 |
| 3.2.5 激光共聚焦观察小鼠巨噬细胞内GFP-M5和GFP-S19与溶酶体、内质网和高尔基体的结合 | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-43页 |
| 3.3.1 小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养 | 第36页 |
| 3.3.2 GFP-M5和GFP-S19侵染RAW264.71h激光共聚焦显微镜观察结果 | 第36-37页 |
| 3.3.3 GFP-M5和GFP-S19侵染RAW264.72h激光共聚焦显微镜观察结果 | 第37-38页 |
| 3.3.4 GFP-M5和GFP-S19侵染RAW264.73h激光共聚焦显微镜观察结果 | 第38-40页 |
| 3.3.5 GFP-M5和GFP-S19侵染RAW264.74h激光共聚焦显微镜观察结果 | 第40-43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 GFP-M5和GFP-S19侵染小鼠巨噬细胞的细胞流式检测与分析 | 第44-47页 |
| 4.1 材料仪器 | 第44页 |
| 4.1.1 材料 | 第44页 |
| 4.1.1.1 菌种 | 第44页 |
| 4.1.1.2 试验细胞 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂盒及仪器 | 第44页 |
| 4.2 方法 | 第44-45页 |
| 4.2.1 布鲁氏菌的培养 | 第44页 |
| 4.2.2 小鼠巨噬细胞的培养 | 第44页 |
| 4.2.3 GFP-M5和GFP-S19侵染小鼠巨噬细胞 | 第44-45页 |
| 4.2.4 GFP-小鼠巨噬细胞的收集 | 第45页 |
| 4.3 结果 | 第45-46页 |
| 4.3.1 GFP-M5和GFP-S19侵染小鼠巨噬细胞流式检测结果 | 第45-46页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 GFP-M5传代绿色荧光丢失率测定 | 第47-51页 |
| 5.1 材料仪器 | 第47页 |
| 5.1.1 材料 | 第47页 |
| 5.1.1.1 菌种 | 第47页 |
| 5.1.1.2 试验细胞 | 第47页 |
| 5.1.2 主要试剂盒及仪器 | 第47页 |
| 5.2 方法 | 第47-48页 |
| 5.2.1 布鲁氏菌的培养 | 第47-48页 |
| 5.2.2 小鼠巨噬细胞的培养 | 第48页 |
| 5.2.3 GFP-M5侵染小鼠巨噬细胞 | 第48页 |
| 5.2.4 GFP-M5侵染小鼠巨噬细胞后荧光显微观察 | 第48页 |
| 5.2.5 GFP-小鼠巨噬细胞的收集 | 第48页 |
| 5.3 结果 | 第48-49页 |
| 5.3.1 GFP+小鼠巨噬细胞荧光倒置显微镜下的观察结果 | 第48-49页 |
| 5.3.2 GFP+小鼠巨噬细胞流式检测结果 | 第49页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第49-51页 |
| 第六章 GFP-M5与GFP-S19感染小鼠后脾脏的观察分析试验 | 第51-56页 |
| 6.1 材料仪器 | 第51页 |
| 6.1.1 材料 | 第51页 |
| 6.1.1.1 菌种 | 第51页 |
| 6.1.1.2 试验动物 | 第51页 |
| 6.1.2 主要试剂和仪器 | 第51页 |
| 6.2 方法 | 第51-52页 |
| 6.2.1 布鲁氏菌的培养 | 第51页 |
| 6.2.2 试验动物的感染 | 第51页 |
| 6.2.3 小鼠脾脏观察试验 | 第51-52页 |
| 6.3 结果 | 第52-54页 |
| 6.3.1 小鼠脾脏拍照观察结果 | 第52页 |
| 6.3.2 小鼠脾脏荧光倒置显微镜下观察结果 | 第52-54页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第54-56页 |
| 第七章 结论 | 第56-57页 |
| 第八章 总结与展望 | 第57-59页 |
| 8.1 总结与展望 | 第57-58页 |
| 8.2 特色与创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66-67页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第67页 |
