| 中文摘要 | 第16-20页 |
| ABSTRACT | 第20-24页 |
| 符号说明 | 第25-27页 |
| 前言 | 第27-39页 |
| 一、RNAi与化疗联合疗法 | 第27-30页 |
| 二、基因与药物共递送载体构建 | 第30-32页 |
| 三、药物载体的选择 | 第32-35页 |
| 四、课题设计 | 第35-39页 |
| 第一部分 多柔比星在不同pH条件下含量测定方法的建立 | 第39-50页 |
| 一、材料 | 第39-40页 |
| 1. 试剂与药品 | 第39页 |
| 2. 主要仪器 | 第39页 |
| 3. 主要溶液配制 | 第39-40页 |
| 二、实验方法 | 第40-41页 |
| 1. Dox激发波长及发射波长的选择 | 第40页 |
| 2. 检测条件的确定 | 第40页 |
| 3. pH5.0、pH6.0、pH7.4 PBS中标准曲线的建立 | 第40页 |
| 4. pH5.0、pH6.0、pH7.4 PBS中精密度实验 | 第40-41页 |
| 5. pH5.0、pH6.0、pH7.4 PBS中方法回收率实验 | 第41页 |
| 三、实验结果 | 第41-49页 |
| 1. Dox激发波长和发射波长的确定 | 第41页 |
| 2. 检测条件 | 第41-42页 |
| 3. pH5.0、pH6.0、pH7.4 PBS中标准曲线的建立结果 | 第42-44页 |
| 3.1 pH5.0 PBS中的标准曲线 | 第42-43页 |
| 3.2 pH6.0 PBS中的标准曲线 | 第43页 |
| 3.3 pH7.4 PBS中的标准曲线 | 第43-44页 |
| 4. pH5.0、pH6.0、pH7.4 PBS中精密度实验 | 第44-47页 |
| 4.1 pH5.0 PBS中日内、日间精密度 | 第44-45页 |
| 4.2 pH6.0 PBS中日内、日间精密度 | 第45-46页 |
| 4.3 pH7.4 PBS中日内、日间精密度 | 第46-47页 |
| 5. pH5.0、pH6.0、pH7.4 PBS中方法回收率实验 | 第47-49页 |
| 5.1 pH5.0 PBS中方法回收率 | 第47页 |
| 5.2 pH6.0 PBS中方法回收率 | 第47-48页 |
| 5.3 pH7.4 PBS中方法回收率 | 第48-49页 |
| 四、讨论 | 第49页 |
| 五、本章小结 | 第49-50页 |
| 第二部分 一步共装载技术构建共载纳米粒及其理化性质评价 | 第50-71页 |
| 一、材料 | 第51-52页 |
| 1. 试剂与药品 | 第51页 |
| 2. 主要仪器 | 第51页 |
| 3. 细胞培养 | 第51-52页 |
| 4. 主要溶液配制 | 第52页 |
| 4.1 无菌pH7.4 PBS | 第52页 |
| 4.2 TBE缓冲液 | 第52页 |
| 二、实验方法 | 第52-57页 |
| 1. CMCS-PEG-NGR的合成 | 第52-53页 |
| 2. CGA-ODNs-Dox的制备及评价 | 第53-55页 |
| 2.1 装载比例的确定 | 第53-54页 |
| 2.2 复合物稳定性评价 | 第54页 |
| 2.3 细胞毒性评价 | 第54-55页 |
| 3. PDR的制备 | 第55页 |
| 4. CPN-PDR的制备 | 第55页 |
| 5. 处方考察 | 第55-56页 |
| 5.1 琼脂糖凝胶电泳 | 第55页 |
| 5.2 PEI用量对PDR的影响 | 第55-56页 |
| 5.3 外层CPN用量对CPN-PDR的影响 | 第56页 |
| 6. 最优处方理化性质考察 | 第56页 |
| 6.1 形态观察 | 第56页 |
| 6.2 粒径及粒度分布的测定 | 第56页 |
| 6.3 zeta电位的测定 | 第56页 |
| 7. CPN-PDR体外释放考察 | 第56-57页 |
| 三、实验结果 | 第57-68页 |
| 1. CMCS-PEG-NGR的合成及验证 | 第57-58页 |
| 2. CGA-ODNs-Dox的制备及评价 | 第58-61页 |
| 2.1 装载比例的确定 | 第58-59页 |
| 2.2 CGA-ODNs-Dox稳定性评价 | 第59-60页 |
| 2.3 细胞毒性评价 | 第60-61页 |
| 3. PDR的制备 | 第61-63页 |
| 4. CPN-PDR的制备 | 第63-65页 |
| 5. 最优处方理化性质考察 | 第65-67页 |
| 5.1 形态观察 | 第65-66页 |
| 5.2 粒径及粒度分布测定结果 | 第66页 |
| 5.3 zeta电位测定结果 | 第66-67页 |
| 6. CPN-PDR体外释放考察结果 | 第67-68页 |
| 四、讨论 | 第68-69页 |
| 五、本章小结 | 第69-71页 |
| 第三部分 共载纳米粒胞内递送药物与基因的研究 | 第71-86页 |
| 一、材料 | 第71-73页 |
| 1. 试剂与药品 | 第71-72页 |
| 2. 主要仪器 | 第72页 |
| 3. 细胞培养 | 第72页 |
| 4. 主要溶液配制 | 第72-73页 |
| 4.1 MTT溶液 | 第72页 |
| 4.2 Hoechst33342染色液 | 第72-73页 |
| 二、实验方法 | 第73-76页 |
| 1. 测定细胞表面CD13的表达量 | 第73页 |
| 2. 纳米粒材料的细胞毒性评价 | 第73页 |
| 3. 空白纳米粒的细胞毒性评价 | 第73-74页 |
| 4. PDR细胞摄取实验 | 第74页 |
| 5. CPN-PDR细胞摄取实验 | 第74-75页 |
| 6. 靶向竞争抑制实验 | 第75页 |
| 7. Dox与siRNA细胞内命运考察 | 第75-76页 |
| 三、实验结果 | 第76-83页 |
| 1. 细胞表面CD13表达的测定结果 | 第76-77页 |
| 2. 纳米粒材料的细胞毒性结果 | 第77-78页 |
| 3. 空白纳米粒的细胞毒性结果 | 第78页 |
| 4. PDR细胞摄取实验结果 | 第78-79页 |
| 5. CPN-PDR细胞摄取实验结果 | 第79-80页 |
| 6. 靶向竞争抑制实验结果 | 第80-81页 |
| 7. Dox与siRNA细胞内命运考察结果 | 第81-83页 |
| 四、讨论 | 第83-84页 |
| 五、本章小结 | 第84-86页 |
| 第四部分 共载纳米粒细胞毒性及体内安全性初步评价 | 第86-106页 |
| 一、材料 | 第86-89页 |
| 1. 试剂与药品 | 第86-87页 |
| 2. 主要仪器 | 第87页 |
| 3. 细胞培养 | 第87页 |
| 4. 主要溶液配制 | 第87-89页 |
| 4.1 5×电泳缓冲液 | 第87-88页 |
| 4.2 10×电转缓冲液 | 第88页 |
| 4.3 10×TBS溶液及TBST溶液 | 第88-89页 |
| 二、实验方法 | 第89-95页 |
| 1. 纳米粒材料的细胞毒性评价 | 第89页 |
| 2. 空白纳米粒的细胞毒性评价 | 第89-90页 |
| 3. Real-Time PCR检测VEGF mRNA水平 | 第90-91页 |
| 3.1 细胞接板及给药 | 第90页 |
| 3.2 总RNA提取 | 第90页 |
| 3.3 逆转录过程 | 第90-91页 |
| 3.4 Real-Time PCR过程 | 第91页 |
| 4. Western blot检测VEGF蛋白水平 | 第91-93页 |
| 4.1 细胞接板及给药 | 第91-92页 |
| 4.2 总蛋白提取 | 第92页 |
| 4.3 BCA试剂盒测定蛋白浓度 | 第92页 |
| 4.4 SDS-PAGE电泳 | 第92-93页 |
| 4.5 转膜 | 第93页 |
| 4.6 抗体孵育及显影 | 第93页 |
| 5. 细胞毒性实验 | 第93-94页 |
| 6. 初步安全性评价 | 第94-95页 |
| 6.1 红细胞溶血实验 | 第94-95页 |
| 6.2 组织切片实验 | 第95页 |
| 三、实验结果 | 第95-103页 |
| 1. 纳米粒材料的细胞毒性结果 | 第95-96页 |
| 2. 空白纳米粒的细胞毒性结果 | 第96-97页 |
| 3. VEGF mRNA水平检测结果 | 第97-98页 |
| 4. VEGF蛋白水平检测结果 | 第98-100页 |
| 5. 细胞毒性实验结果 | 第100-101页 |
| 6. 初步安全性评价结果 | 第101-103页 |
| 6.1 溶血实验结果 | 第101-103页 |
| 6.2 组织切片实验结果 | 第103页 |
| 四、讨论 | 第103-105页 |
| 五、本章小结 | 第105-106页 |
| 总结与展望 | 第106-109页 |
| 一、结论 | 第106-107页 |
| 二、创新点 | 第107-108页 |
| 三、展望 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 攻读硕士期间发表论文目录 | 第119-120页 |
| 文献综述 | 第120-131页 |
| 参考文献 | 第127-131页 |
| 附件 | 第131页 |
