| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-15页 |
| 1.1 达氏鳇概述 | 第10页 |
| 1.2 促性腺激素概述 | 第10-14页 |
| 1.2.1 促性腺激素的基础生理学研究 | 第10-11页 |
| 1.2.2 鱼类促性腺激素基因克隆研究 | 第11-12页 |
| 1.2.3 鱼类促性腺激素的定量分析 | 第12-13页 |
| 1.2.4 鱼类促性腺激素基因重组表达 | 第13页 |
| 1.2.5 促性腺激素基因研究展望 | 第13-14页 |
| 1.3 本文研究的目的及意义 | 第14页 |
| 1.4 实验内容 | 第14-15页 |
| 第二章 达氏鳇促性腺激素cDNA的克隆 | 第15-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第15-16页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-23页 |
| 2.2.1 达氏鳇总RNA的提取 | 第17页 |
| 2.2.2 达氏鳇总RNA的检测 | 第17-18页 |
| 2.2.3 反转录 | 第18页 |
| 2.2.4 目的片段扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.5 PCR产物的回收与纯化 | 第19-20页 |
| 2.2.6 连接、转化、阳性克隆鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.7 基因 5’端、3’端克隆 | 第21-23页 |
| 2.3 实验结果 | 第23-26页 |
| 2.3.1 达氏鳇GtH总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.3.2 中间片段扩增结果 | 第24页 |
| 2.3.3 扩增结果 | 第24-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 达氏鳇促性腺激素基因生物信息学分析 | 第27-36页 |
| 3.1 分析工具 | 第27页 |
| 3.2 实验结果 | 第27-35页 |
| 3.2.1 基因基本信息 | 第27-29页 |
| 3.2.2 疏水性分析 | 第29-30页 |
| 3.2.3 跨膜区分析 | 第30-31页 |
| 3.2.4 二级结构分析 | 第31-32页 |
| 3.2.5 三级结构分析 | 第32-33页 |
| 3.2.6 氨基酸相似性分析 | 第33-34页 |
| 3.2.7 进化树的构建 | 第34-35页 |
| 3.3 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 达氏鳇促性腺激素基因表达量分析 | 第36-44页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第36页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第36-37页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 4.2.1 组织表达检测方法 | 第37页 |
| 4.2.2 达氏鳇RNA的提取 | 第37-38页 |
| 4.2.3 达氏鳇总RNA的检测 | 第38页 |
| 4.2.4 RNA反转录cDNA | 第38-39页 |
| 4.2.5 引物设计 | 第39页 |
| 4.2.6 实时荧光定量 | 第39-40页 |
| 4.3 实验结果 | 第40-43页 |
| 4.3.1 达氏鳇各个组织样本RNA的提取 | 第40-42页 |
| 4.3.2 荧光定量表达分析 | 第42-43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 达氏鳇促性腺激素原核表达分析 | 第44-61页 |
| 5.1 实验材料 | 第44-46页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第44页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第44-45页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第45页 |
| 5.1.4 主要实验试剂的配置 | 第45-46页 |
| 5.2 表达载体构建 | 第46-51页 |
| 5.2.1 达氏鳇总RNA的提取 | 第46-47页 |
| 5.2.2 达氏鳇总RNA的检测 | 第47页 |
| 5.2.3 RNA反转录cDNA | 第47-48页 |
| 5.2.4 引物设计 | 第48页 |
| 5.2.5 目的片段（ORF）的扩增及回收纯化 | 第48-49页 |
| 5.2.6 PCR产物的回收与纯化 | 第49页 |
| 5.2.7 构建重组表达载体BluntE1-ORF | 第49-50页 |
| 5.2.8 质粒提取 | 第50-51页 |
| 5.2.9 重组质粒转化BL21（DE3） | 第51页 |
| 5.2.10 重组质粒转化BL21（DE3） | 第51页 |
| 5.3 蛋白诱导表达 | 第51-54页 |
| 5.3.1 表达形式分析 | 第51-52页 |
| 5.3.2 SDS-PAGE电泳 | 第52-53页 |
| 5.3.3 表达条件的优化 | 第53页 |
| 5.3.4 蛋白的大量制备 | 第53页 |
| 5.3.5 蛋白的纯化 | 第53页 |
| 5.3.6 Western Blot鉴定 | 第53-54页 |
| 5.4 实验结果 | 第54-60页 |
| 5.4.1 达氏鳇总RNA的提取 | 第54-55页 |
| 5.4.2 目的片段扩增结果 | 第55页 |
| 5.4.3 表达载体转化结果 | 第55-56页 |
| 5.4.4 表达形式分析 | 第56-57页 |
| 5.4.5 表达条件优化 | 第57-58页 |
| 5.4.6 蛋白纯化分析 | 第58-60页 |
| 5.5 讨论 | 第60-61页 |
| 第六章 结论与展望 | 第61-62页 |
| 6.1 结论 | 第61页 |
| 6.2 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |