| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| 1.1 链霉菌简介 | 第11-12页 |
| 1.2 链霉菌的次级代谢 | 第12-13页 |
| 1.3 Ⅰ型PKS | 第13-15页 |
| 1.4 安莎类抗生素 | 第15-23页 |
| 1.4.1 AHBA的合成 | 第16-18页 |
| 1.4.2 格尔德菌素的生物合成 | 第18-20页 |
| 1.4.3 利福霉素B的生物合成 | 第20-23页 |
| 1.5 Streptomyces hygroscopicus ATCC29253研究现状 | 第23-25页 |
| 1.6 研究的目的及意义 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-41页 |
| 2.1 试验用菌株 | 第27-28页 |
| 2.2 试验用质粒和引物 | 第28-32页 |
| 2.3 试验用培养基 | 第32-33页 |
| 2.4 试剂 | 第33-35页 |
| 2.4.1 分子生物学试剂 | 第33-34页 |
| 2.4.2 缓冲液和溶液 | 第34-35页 |
| 2.5 实验方法 | 第35-41页 |
| 2.5.1 链霉菌的培养及菌种保藏 | 第35-36页 |
| 2.5.2 地中海拟无枝酸菌S699的培养及菌种保藏 | 第36页 |
| 2.5.3 大肠杆菌DH5α感受态的制备和转化 | 第36页 |
| 2.5.4 碱裂解法提取质粒验证 | 第36-37页 |
| 2.5.5 提取链霉菌基因组DNA | 第37页 |
| 2.5.6 链霉菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第37页 |
| 2.5.7 链霉菌的种间接合转移 | 第37-38页 |
| 2.5.8 Southern杂交 | 第38-40页 |
| 1) 探针处理:地高辛标记 | 第38页 |
| 2) 转膜 | 第38-39页 |
| 3) 杂交 | 第39页 |
| 4) 显色 | 第39-40页 |
| 2.5.9 地中海拟无枝酸菌S699电转化 | 第40-41页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第41-70页 |
| 3.1 克隆完整的hygrocins生物合成基因簇 | 第41-49页 |
| 3.1.1 文库的PCR筛选 | 第41-42页 |
| 3.1.2 基因簇的生物信息学分析 | 第42-49页 |
| 3.2 Hygrocins基因簇中关键基因的中断和敲除 | 第49-63页 |
| 3.2.1 PKS基因中断突变菌株的构建 | 第51-54页 |
| 3.2.2 orf12、orf15、orf41和orf42基因中断突变株的构建 | 第54-57页 |
| 3.2.3 氧化酶基因敲除突变株的构建 | 第57-62页 |
| 3.2.4 调控基因敲除突变菌株的构建 | 第62-63页 |
| 3.3 地中海拟无枝酸菌突变株的构建 | 第63-68页 |
| 3.3.1 地中海拟无枝酸菌S699电转化条件的优化 | 第63-67页 |
| 3.3.2 氧化酶敲除突变株的构建 | 第67-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第四章 总结与展望 | 第70-71页 |
| 4.1 总结 | 第70页 |
| 4.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
