| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-17页 |
| 1.1 甾体化合物概述 | 第8页 |
| 1.2 甾体化合物的微生物转化 | 第8-9页 |
| 1.2.1 甾体化合物微生物转化的特点 | 第9页 |
| 1.2.2 甾体微生物转化的位置及类型 | 第9页 |
| 1.3 微生物羟基化 | 第9-14页 |
| 1.3.1 微生物羟基化反应原理 | 第10-11页 |
| 1.3.2 甾体羟化酶的诱导性 | 第11-12页 |
| 1.3.3 甾体微生物11α-羟基化反应 | 第12页 |
| 1.3.4 赭曲霉11α-羟基化 | 第12-14页 |
| 1.4 大肠杆菌表达系统 | 第14-16页 |
| 1.4.1 大肠杆菌的生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.4.2 外源蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第15页 |
| 1.4.3 影响外源基因在大肠杆菌中表达的因素 | 第15-16页 |
| 1.5 本课题研究的目的、意义 | 第16页 |
| 1.6 本论文的主要研究内容 | 第16-17页 |
| 2 材料和方法 | 第17-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-22页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要溶液与缓冲液 | 第19-21页 |
| 2.1.5 培养基与抗生素 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 赭曲霉甾体11-α羟化酶基因AOH及其截短体AOH-33、AOH-25、AOH-20的生化性质的预测 | 第22页 |
| 2.2.2 赭曲霉甾体11-α羟化酶AOH及其截短体AOH-33、AOH-25、AOH-20的克隆 | 第22-26页 |
| 2.2.3 大肠杆菌表达质粒的构建 | 第26页 |
| 2.2.4 重组菌在大肠杆菌中表达 | 第26-27页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE分析 | 第27-28页 |
| 2.2.6 酵母表达质粒的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.7 酿酒酵母电转化方法 | 第30-31页 |
| 2.2.8 酵母转化子的筛选与鉴定 | 第31页 |
| 2.2.9 重组酵母菌的培养及其甾体转化 | 第31-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-54页 |
| 3.1 甾体羟化酶AOH及其截短体AOH-33、AOH-25、AOH-20、生化性质的预测 | 第33-35页 |
| 3.1.1 AOH及其截短体AOH-33、AOH-25、AOH-20的基本性质 | 第33-34页 |
| 3.1.2 AOH及其截短体AOH-33、AOH-25、AOH-20的稳定性分析 | 第34-35页 |
| 3.2 11-α羟化酶基因在酿酒酵母中的表达 | 第35-45页 |
| 3.2.1 11-α羟化酶基因的扩增、克隆及测序 | 第35-36页 |
| 3.2.2 酿酒酵母表达载体的构建 | 第36-39页 |
| 3.2.3 阳性重组酵母转化子的筛选 | 第39-41页 |
| 3.2.4 重组酵母菌的甾体转化活性分析 | 第41-45页 |
| 3.3 11-α羟化酶基因AOH表达质粒的构建 | 第45-48页 |
| 3.3.1 11-α羟化酶基因AOH的扩增和克隆 | 第45-47页 |
| 3.3.2 p22b -AOH和p22b -AOH-33、p22b -AOH-25、p22b -AOH-20质粒的构建 | 第47-48页 |
| 3.4 还原酶基因AOR表达质粒的构建 | 第48-50页 |
| 3.4.1 还原酶基因AOR的克隆与扩增 | 第48-49页 |
| 3.4.2 表达质粒pET22b-AOR的构建 | 第49-50页 |
| 3.5 大肠杆菌表达系统的甾体转化活性检测 | 第50-51页 |
| 3.6 11-α羟化酶基因AOH在大肠杆菌BL21中蛋白表达 | 第51-52页 |
| 3.7 赭曲霉还原酶基因AOR在大肠杆菌BL21中蛋白表达 | 第52-54页 |
| 4 结论 | 第54-55页 |
| 5 展望 | 第55-56页 |
| 6 参考文献 | 第56-62页 |
| 7 论文发表情况 | 第62-63页 |
| 8 致谢 | 第63页 |
