| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 绪论 | 第17-27页 |
| 1.1 茭白和菰黑粉菌的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.1.1 茭白简介 | 第17页 |
| 1.1.2 菰黑粉菌简介 | 第17-18页 |
| 1.1.3 茭白与菰黑粉菌的互作研究 | 第18-19页 |
| 1.2 真菌二型态转换的调控研究 | 第19-21页 |
| 1.2.1 环境因子对真菌二型态的调控研究 | 第19-20页 |
| 1.2.2 细胞内信号转导途径对真菌二型态的调控研究 | 第20页 |
| 1.2.3 真菌二型态转换与其致病性的关系 | 第20-21页 |
| 1.3 a交配型位点的研究 | 第21-24页 |
| 1.3.1 α位点组成 | 第21页 |
| 1.3.2 已知黑粉菌a位点组成的异同 | 第21-23页 |
| 1.3.3 α交配型位点的作用 | 第23页 |
| 1.3.4 α位点的作用途径 | 第23-24页 |
| 1.4 真菌遗传转化方法 | 第24-25页 |
| 1.4.1 真菌遗传转化方法简介 | 第24-25页 |
| 1.4.2 CaCl_2/PEG介导转化法的原理及优势 | 第25页 |
| 1.5 研究内容及意义 | 第25-27页 |
| 2 基本材料和方法 | 第27-33页 |
| 2.1 供试菌株及质粒 | 第27-28页 |
| 2.2 主要设备 | 第28页 |
| 2.3 主要试剂及培养基 | 第28-29页 |
| 2.4 方法 | 第29-32页 |
| 2.4.1 菰黑粉菌总RNA提取及反转录 | 第29-30页 |
| 2.4.2 菰黑粉菌DNA提取 | 第30页 |
| 2.4.3 基因克隆 | 第30-31页 |
| 2.4.4 qRT-PCR方法体系 | 第31-32页 |
| 2.4.5 原生质体制备和再生 | 第32页 |
| 2.4.6 CaCl_2/PEG介导基因转化 | 第32页 |
| 2.5 数据统计分析 | 第32-33页 |
| 3 菰黑粉菌遗传转化体系的建立和优化 | 第33-45页 |
| 3.1 材料和方法 | 第33-37页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 原生质体制备中酶解效率的影响条件优化 | 第33页 |
| 3.1.3 原生质体制备中稳渗剂的优化 | 第33-34页 |
| 3.1.4 抗性标记的筛选 | 第34-35页 |
| 3.1.5 质粒在宿主中复制类型的筛选 | 第35页 |
| 3.1.6 UeICL基因敲除菌株构建 | 第35-36页 |
| 3.1.7 EGFP基因过表达菌株构建 | 第36-37页 |
| 3.1.8 转化子的PCR验证和显微观察 | 第37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-43页 |
| 3.2.1 不同酶解条件对原生质体制备的影响 | 第37-39页 |
| 3.2.2 不同稳渗剂对原生质体形成和再生的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.3 抗性标记的筛选及转化质粒类型的选择 | 第40-41页 |
| 3.2.4 菰黑粉菌基因敲除和过表达 | 第41-43页 |
| 3.3 讨论 | 第43-45页 |
| 4 菰黑粉菌a位点的克隆和结构分析 | 第45-76页 |
| 4.1 材料和方法 | 第45-50页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.1.2 菰黑粉菌a位点的克隆 | 第45页 |
| 4.1.3 mfa、pra基因的克隆 | 第45页 |
| 4.1.4 与菌丝生长相关基因的克隆 | 第45-46页 |
| 4.1.5 基因的拼接及序列分析 | 第46页 |
| 4.1.6 mfa、pra敲除载体的构建 | 第46-48页 |
| 4.1.7 基因敲除载体转化原生质体 | 第48页 |
| 4.1.8 转化子的挑选和PCR验证 | 第48-49页 |
| 4.1.9 转化子qRT-PCR验证 | 第49页 |
| 4.1.10 mfa、pra基因缺失菌株融合实验及显微观察 | 第49页 |
| 4.1.11 qRT-PCR分析mfa、pra基因与菰黑粉菌二型态转换的关系 | 第49-50页 |
| 4.1.12 mfa、pra基因缺失对其它菌丝生长相关基因的影响 | 第50页 |
| 4.2 结果与分析 | 第50-73页 |
| 4.2.1 菰黑粉菌a位点的克隆和结构分析 | 第50-52页 |
| 4.2.2 mfa、pra基因c DNA序列克隆和生物信息学分析 | 第52-54页 |
| 4.2.3 菌丝相关基因的克隆和生物信息学分析 | 第54-57页 |
| 4.2.4 mfa、pra缺失菌株的获得 | 第57-59页 |
| 4.2.5 mfa、pra基因的缺失对菰黑粉菌菌丝生长的影响 | 第59-61页 |
| 4.2.6 mfa、pra基因缺失对其它菌丝生长相关基因的影响 | 第61-73页 |
| 4.3 讨论 | 第73-76页 |
| 5 总结与展望 | 第76-79页 |
| 5.1 全文总结 | 第76-78页 |
| 5.2 课题展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 附录 | 第87-91页 |
| 附录一 pUe-Hyg、pICL-Hyg和p UMa932载体构建引物和验证引物 | 第87页 |
| 附录二 α位点扩增引物 | 第87-88页 |
| 附录三 菰黑粉菌mfa、pra基因扩增引物 | 第88页 |
| 附录四 菰黑粉菌Ueubc2、Uegpa3基因扩增引物 | 第88-89页 |
| 附录五 Ue T14、Ue T55菌mfa、pra敲除载体构建引物及转化子验证引物 | 第89-90页 |
| 附录六 Ue T14、Ue T55菌mfa、pra基因q RT-PCR验证引物 | 第90-91页 |
| 作者简介 | 第91页 |
