| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 木聚糖 | 第8-9页 |
| 1.2 木聚糖酶 | 第9-11页 |
| 1.2.1 木聚糖酶的定义 | 第9页 |
| 1.2.2 木聚糖酶的归类 | 第9页 |
| 1.2.3 木聚糖酶的催化机制 | 第9-11页 |
| 1.3 GH 11家族木聚糖酶的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.3.1 GH 11家族木聚糖酶的三维结构特征 | 第11-12页 |
| 1.3.2 GH 11家族木聚糖酶的pH特性 | 第12页 |
| 1.3.3 GH 11家族木聚糖酶的温度特性 | 第12-14页 |
| 1.4 木聚糖酶的应用 | 第14-16页 |
| 1.4.1 饲料与食品 | 第15页 |
| 1.4.2 造纸与纺织 | 第15页 |
| 1.4.3 医药与能源 | 第15-16页 |
| 1.5 课题研究意义和目标 | 第16页 |
| 1.6 课题研究内容 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 工具酶与试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 培养基 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第19页 |
| 2.1.5 主要实验设备 | 第19-20页 |
| 2.1.6 主要网站和软件 | 第20页 |
| 2.1.7 PCR引物 | 第20-21页 |
| 2.2 N-端置换及“cord”结构内定点突变的实验方法 | 第21-32页 |
| 2.2.1 AoXyn11A和pXYL11一级结构的比对和分析 | 第21页 |
| 2.2.2 同源建模及分子动力学模拟 | 第21页 |
| 2.2.3 杂合酶基因ATx11A和突变酶基因ATx11AM的扩增 | 第21-23页 |
| 2.2.4 E. coli JM109感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2.2.5 重组克隆质粒的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.6 重组表达质粒的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.7 重组表达质粒的线性化与纯化回收 | 第27-28页 |
| 2.2.8 P. pastoris GS115感受态的制备 | 第28页 |
| 2.2.9 电击转化P. pastoris GS115感受态细胞 | 第28页 |
| 2.2.10 重组酵母的筛选及鉴定 | 第28页 |
| 2.2.11 重组酵母的诱导表达及木聚糖酶的分离纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.12 表达产物的鉴定和分析 | 第29-30页 |
| 2.2.13 酶学性质的测定 | 第30-32页 |
| 2.3 去N-端盐桥和N-糖基化位点的实验方法 | 第32-34页 |
| 2.3.1 突变酶基因ATx11AD11N和ATx11AS的扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.2 重组克隆质粒的构建 | 第33页 |
| 2.3.3 重组表达质粒的构建 | 第33页 |
| 2.3.4 毕赤酵母的转化、鉴定、筛选和表达 | 第33页 |
| 2.3.5 表达产物的鉴定和分析 | 第33页 |
| 2.3.6 酶学性质的测定 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第34-52页 |
| 3.1 N-端置换及“cord”结构内定点突变的实验结果及讨论 | 第34-46页 |
| 3.1.1 中温酶AoXyn11A和耐热酶pXYL11一级结构的分析 | 第34页 |
| 3.1.2 置换片段的确定 | 第34-35页 |
| 3.1.3 ATX11A突变位点的确定 | 第35-36页 |
| 3.1.4 RMSD值的比较 | 第36-37页 |
| 3.1.5 杂合酶和突变酶基因及重组质粒的构建 | 第37-39页 |
| 3.1.6 毕赤酵母重组子的构建和筛选 | 第39-40页 |
| 3.1.7 木聚糖酶的表达和纯化 | 第40-41页 |
| 3.1.8 酶学性质 | 第41-44页 |
| 3.1.9 ATX11A和ATX11AM耐热性提高原因的讨论 | 第44-46页 |
| 3.2 去N-端盐桥和N-糖基化位点的实验结果和讨论 | 第46-52页 |
| 3.2.1 突变酶基因、重组克隆质粒及重组表达质粒的构建 | 第46-50页 |
| 3.2.2 突变酶ATX11AD11N和ATX11AS的温度特性 | 第50-52页 |
| 主要结论与展望 | 第52-54页 |
| 主要结论 | 第52-53页 |
| 展望 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第61页 |
