| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| ·油菜的基本研究背景 | 第9页 |
| ·油菜重要基因的研究进展 | 第9-13页 |
| ·与抗逆性有关的基因 | 第9-10页 |
| ·油脂代谢相关基因 | 第10-11页 |
| ·裂果相关基因研究 | 第11-12页 |
| ·雄性不育和育性恢复相关基因研究 | 第12-13页 |
| ·植物ADC基因的研究进展 | 第13-15页 |
| ·植物ADC基因及编码蛋白的基本特性 | 第13-14页 |
| ·ADC基因的定位与编码蛋白的分布 | 第14-15页 |
| ·ADC基因的表达特性 | 第15页 |
| ·植物基因克隆的主要策略 | 第15-21页 |
| ·图位克隆 | 第15-16页 |
| ·转座子标记法 | 第16-17页 |
| ·同源克隆 | 第17-18页 |
| ·表达序列标签法 | 第18-19页 |
| ·差异表达基因克隆技术 | 第19-21页 |
| 第二章 引言 | 第21-23页 |
| ·研究的目的与意义 | 第21页 |
| ·技术路线 | 第21-23页 |
| 第三章 甘蓝型油菜ADC基因的克隆与序列分析 | 第23-43页 |
| ·试验材料与试剂 | 第23-24页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·克隆载体与大肠杆菌感受态 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·自配的主要化学试剂 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-29页 |
| ·花蕾RNA提取(Trizol法) | 第24页 |
| ·ADC基因保守区域的扩增 | 第24-26页 |
| ·利用RACE技术克隆ADC基因cDNA的3’和5’末端 | 第26-27页 |
| ·ADC基因cDNA ORF扩增 | 第27-28页 |
| ·ADC基因cDNA全长的生物信息学分析方法 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-40页 |
| ·甘蓝型油菜ADC基因cDNA全长的克隆 | 第29-31页 |
| ·甘蓝型油菜ADC基因及编码蛋白的生物信息学分析 | 第31-40页 |
| ·讨论 | 第40-43页 |
| 第四章 甘蓝型油菜ADC基因的原核表达 | 第43-55页 |
| ·试验材料与试剂 | 第44-45页 |
| ·试验材料 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要设备 | 第44页 |
| ·自配主要试剂 | 第44-45页 |
| ·试验方法 | 第45-50页 |
| ·质粒DNA提取 | 第45页 |
| ·表达目的基因蛋白的引物设计 | 第45-46页 |
| ·BnADC1基因ORF序列加酶切位点扩增 | 第46页 |
| ·pET30a(+)质粒和目的基因片段的双酶切 | 第46-47页 |
| ·酶切片段胶回收与连接 | 第47页 |
| ·菌液PCR与双酶切验证 | 第47页 |
| ·重组质粒转化BL21(DE3)及菌落PCR鉴定 | 第47页 |
| ·BnADC1融合蛋白的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·BnADC1融合蛋白表达的可溶性分析 | 第48页 |
| ·BnADC1融合蛋白的SDS-PAGE检测 | 第48-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·BnADC1编码区添加双酶切位点的PCR扩增 | 第50页 |
| ·pET30a(+)/BnADC1重组质粒的PCR鉴定、双酶切与测序 | 第50-51页 |
| ·BnADC1蛋白的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第51-52页 |
| ·BnADC1蛋白在BL21(DE3)中的诱导表达方式 | 第52页 |
| ·IPTG对BnADC1蛋白表达的影响 | 第52-53页 |
| ·诱导时间对BnADC1蛋白表达的影响 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 结论 | 第55-57页 |
| ·结论 | 第55页 |
| ·甘蓝型油菜ADC基因保守区域的克隆 | 第55页 |
| ·甘蓝型油菜ADC基因全长cDNA的获得及同源性分析 | 第55页 |
| ·成功构建BnADC1基因的原核表达载体 | 第55页 |
| ·BnADC1基因在大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)中的诱导表达 | 第55页 |
| ·下一步工作打算 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-69页 |
| 缩略词表 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 附录1 BnADC1基因cDNA全长序列 | 第73-74页 |
| 附录2 BnADC2基因cDNA全长序列 | 第74-75页 |
| 附录3 pET30a(+)图谱 | 第75-76页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第76页 |
