利用CRISPR/Cas9技术构建补体Ⅲ基因缺陷猪模型
| 英文缩略表 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第11-16页 |
| 1.1 补体Ⅲ基因研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.1 补体Ⅲ基因简介 | 第12页 |
| 1.1.2 补体Ⅲ基因功能 | 第12-13页 |
| 1.1.3 补体Ⅲ缺陷的影响 | 第13页 |
| 1.2 免疫缺陷动物模型研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 基因编辑技术 | 第14-15页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第15-16页 |
| 第二章 补体Ⅲ基因敲除载体的构建 | 第16-28页 |
| 2.1 前言 | 第16页 |
| 2.2 实验材料 | 第16-19页 |
| 2.2.1 实验试剂及仪器 | 第16-18页 |
| 2.2.2 常用试剂配制 | 第18-19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-25页 |
| 2.3.1 设计C3基因打靶sgRNA | 第19-20页 |
| 2.3.2 C3-Cas9打靶载体构建 | 第20-25页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第25-27页 |
| 2.5 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 补体Ⅲ基因敲除细胞的建立 | 第28-50页 |
| 3.1 前言 | 第28页 |
| 3.2 实验材料 | 第28-31页 |
| 3.2.1 实验试剂及仪器 | 第29-30页 |
| 3.2.2 常用试剂配制 | 第30-31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-39页 |
| 3.3.1 猪原代成纤维细胞系(PFFs)建立 | 第31-32页 |
| 3.3.2 C3-Cas9载体转染PFFs | 第32-33页 |
| 3.3.3 T7E1酶切鉴定敲除效率 | 第33-35页 |
| 3.3.4 C3基因打靶细胞克隆的筛选及鉴定 | 第35-39页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第39-47页 |
| 3.5 讨论 | 第47-50页 |
| 第四章 补体Ⅲ基因敲除猪模型的建立 | 第50-70页 |
| 4.1 前言 | 第50页 |
| 4.2 实验材料 | 第50-52页 |
| 4.2.1 实验试剂及仪器 | 第50-51页 |
| 4.2.2 常用试剂配制 | 第51-52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-55页 |
| 4.3.1 补体Ⅲ基因敲除猪模型构建 | 第52-53页 |
| 4.3.2 补体Ⅲ基因敲除猪基因型鉴定 | 第53-55页 |
| 4.3.3 补体Ⅲ基因敲除猪原代成纤维细胞的分离 | 第55页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第55-60页 |
| 4.5 讨论 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 综述 | 第70-89页 |
| 参考文献 | 第80-89页 |
| 攻读学位期间发表文章 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
