| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-36页 |
| 1.1 研究背景与选题目标 | 第10-11页 |
| 1.2 MicroRNA检测技术研究进展 | 第11-23页 |
| 1.2.1 Northern印记法及其衍生技术检测miRNA | 第11-12页 |
| 1.2.2 基于DNA微阵列技术的miRNA检测技术 | 第12-13页 |
| 1.2.3 基于聚合酶链式反应(PCR)的miRNA检测技术 | 第13-14页 |
| 1.2.4 基于逆转录PCR的miRNA检测技术 | 第14-15页 |
| 1.2.5 基于连接酶链式反应(LCR)的miRNA检测技术 | 第15-16页 |
| 1.2.6 基于支化滚环扩增(B-RCA)的miRNA检测技术 | 第16-17页 |
| 1.2.7 基于恒温指数扩增反应(EXPAR)的miRNA检测技术 | 第17-18页 |
| 1.2.8 基于环介导等温扩增(LAMP)的miRNA检测技术 | 第18-19页 |
| 1.2.9 基于循环酶切策略的miRNA检测技术 | 第19-20页 |
| 1.2.10 基于磁性微球复合材料的miRNA检测技术 | 第20-22页 |
| 1.2.11 基于下一代测序的miRNA检测技术 | 第22-23页 |
| 1.3 蛋白激酶活性分析技术研究进展 | 第23-34页 |
| 1.3.1 基于质量变化的检测手段 | 第23-25页 |
| 1.3.2 基于反应后净电荷变化的检测手段 | 第25-27页 |
| 1.3.3 基于抗体识别的检测技术 | 第27-29页 |
| 1.3.4 基于金属离子亲和效应的蛋白激酶检测 | 第29-30页 |
| 1.3.5 基于磷酸基团阻碍多肽酶切的蛋白激酶检测 | 第30-31页 |
| 1.3.6 基于磷酸化前后底物构象变化的蛋白激酶检测 | 第31-32页 |
| 1.3.7 基于ATP标记物的检测技术 | 第32-34页 |
| 1.4 本论文的选题思想和主要研究内容 | 第34-36页 |
| 第二章 基于单微球荧光信号富集机制的microRNA检测 | 第36-52页 |
| 2.1 前言 | 第36-37页 |
| 2.2 实验原理 | 第37-38页 |
| 2.3 实验材料与仪器设备 | 第38-39页 |
| 2.4 实验操作 | 第39-42页 |
| 2.4.1 磁性微球表面偶联类恒温指数扩增模板 | 第39页 |
| 2.4.2 单个微球的抓取 | 第39-40页 |
| 2.4.3 单个微球富集目标miRNA | 第40页 |
| 2.4.4 微球表面恒温指数扩增 | 第40页 |
| 2.4.5 扩增后微球染色 | 第40-41页 |
| 2.4.6 Total RNA及单个细胞中miRNA的获取 | 第41页 |
| 2.4.7 单微球荧光信号成像策略检测单个微球 | 第41-42页 |
| 2.5 实验条件的优化 | 第42-44页 |
| 2.5.1 Vent(exo-)DNA聚合酶用量的优化 | 第42-43页 |
| 2.5.2 Nt.BtsNBI切刻内切酶用量的优化 | 第43-44页 |
| 2.6 实验结果与讨论 | 第44-50页 |
| 2.6.1 MiRNA的定量检测结果 | 第44-46页 |
| 2.6.2 MiRNA检测的特异性研究 | 第46-47页 |
| 2.6.3 MiRNA检测的通用性研究 | 第47页 |
| 2.6.4 实际样品与单个细胞中的miRNA检测 | 第47-50页 |
| 2.7 本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 基于单微球荧光信号富集机制的蛋白激酶活性分析 | 第52-68页 |
| 3.1 前言 | 第52-53页 |
| 3.2 实验原理 | 第53-54页 |
| 3.3 实验试剂及仪器设备 | 第54页 |
| 3.4 实验操作 | 第54-56页 |
| 3.4.1 稀土离子功能化及Zr基磁性微球的制备 | 第54-55页 |
| 3.4.2 单个微球的抓取 | 第55页 |
| 3.4.3 蛋白激酶催化的荧光修饰底物磷酸化 | 第55页 |
| 3.4.4 单微球荧光磷酸化多肽的富集 | 第55页 |
| 3.4.5 细胞培养与刺激 | 第55-56页 |
| 3.4.6 单个细胞激酶获取及活性分析 | 第56页 |
| 3.5 实验结果与讨论 | 第56-66页 |
| 3.5.1 不同稀土元素结合磷酸化能力相对强度研究 | 第56-58页 |
| 3.5.2 微球表面ssDNA及稀土负载量的研究 | 第58-59页 |
| 3.5.3 不同序列ssDNA对实验结果的影响 | 第59页 |
| 3.5.4 单微球富集对比多微球富集 | 第59-60页 |
| 3.5.5 基于单微球荧光信号富集机制的PKA活性分析 | 第60-62页 |
| 3.5.6 稀土基Dy-MB与Zr-MB,Ti-MB的检测效果对比 | 第62-63页 |
| 3.5.7 实验方案在抑制剂筛选中的应用 | 第63-64页 |
| 3.5.8 有限个数及单个细胞中PKA的检测 | 第64-65页 |
| 3.5.9 基于单微球荧光信号富集机制蛋白激酶的活性分析的通用性 | 第65-66页 |
| 3.6 本章小结 | 第66-68页 |
| 附录 | 第68-74页 |
| 表-1 MiRNA检测技术相对指标汇总表 | 第68-69页 |
| 表-2 蛋白激酶(以PKA为模型)检测技术灵敏度汇总表 | 第69-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第84页 |
