| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| 1.1 引言 | 第14-15页 |
| 1.2 树鼩作为实验动物模型的研究现状 | 第15-20页 |
| 1.2.1 树鼩基础生物学 | 第15-18页 |
| 1.2.2 树鼩作为实验动物研究的一些进展 | 第18-20页 |
| 1.3 实现转基因操作的途径 | 第20-22页 |
| 1.4 哺乳动物精原干细胞研究进展 | 第22-26页 |
| 1.4.1 精原干细胞简介 | 第22-23页 |
| 1.4.2 精原干细胞标记物研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4.3 精原干细胞的分离与培养 | 第24-25页 |
| 1.4.3.1 精原干细胞的分离与纯化 | 第24-25页 |
| 1.4.3.2 精原干细胞的培养 | 第25页 |
| 1.4.4 精原干细胞的用途与作用 | 第25-26页 |
| 1.4.5 利用精原干细胞进行基因修饰的概况及挑战 | 第26页 |
| 1.5 利用精原干细胞进行转基因树鼩构建的展望 | 第26-28页 |
| 第二章 树鼩精原干细胞的获取 | 第28-38页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第28页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.3 实验试剂配制方法 | 第29-30页 |
| 2.2.4 实验器材 | 第30-32页 |
| 2.2.5 实验设计 | 第32-36页 |
| 2.2.5.1 实验一：树鼩睾丸原代细胞的获取 | 第32-34页 |
| 2.2.5.2 实验二：树鼩精原干细胞的获取 | 第34-36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 慢病毒载体构建 | 第38-52页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料与方法 | 第38-50页 |
| 3.2.1 实验用质粒 | 第38页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第38-40页 |
| 3.2.3 实验试剂的配制 | 第40-41页 |
| 3.2.4 实验器材 | 第41-42页 |
| 3.2.5 实验设计 | 第42-50页 |
| 3.2.5.1 实验一：pTomo载体的巨细胞病毒(CMV)启动子替换为EF1a启动子 | 第42-48页 |
| 3.2.5.2 实验二：将SIV慢病毒载体的CAG启动子替换为EF1a启动子 | 第48-49页 |
| 3.2.5.3 实验三：将SIV慢病毒载体的CAG启动子替换为PGK启动子 | 第49-50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-51页 |
| 3.3.1 pTomo慢病毒载体CMV启动子替换为EF1a启动子 | 第50页 |
| 3.3.2 SIV慢病毒载体CAG启动子替换为EF1a启动子 | 第50-51页 |
| 3.3.3 SIV慢病毒载体CAG启动子替换为PGK启动子 | 第51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 不同慢病毒包装效率及感染效果比较 | 第52-68页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第52-60页 |
| 4.2.1 慢病毒包装所需包装质粒 | 第52页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第52-53页 |
| 4.2.3 实验试剂配制方法 | 第53-54页 |
| 4.2.4 实验器材 | 第54页 |
| 4.2.5 实验设计 | 第54-60页 |
| 4.2.5.1 慢病毒载体大批量质粒提取 | 第54-56页 |
| 4.2.5.2 pTomo系列慢病毒包装 | 第56-59页 |
| 4.2.5.3 SIV系列慢病毒包装 | 第59页 |
| 4.2.5.4 慢病毒感染测试 | 第59-60页 |
| 4.3 实验结果 | 第60-66页 |
| 4.3.1 pTomo系列慢病毒包装 | 第60-61页 |
| 4.3.1.1 pTomo慢病毒包装 | 第60页 |
| 4.3.1.2 pTomo-EF1a慢病毒包装 | 第60-61页 |
| 4.3.2 SIV系列慢病毒包装 | 第61-63页 |
| 4.3.2.1 SIV慢病毒包装 | 第61-62页 |
| 4.3.2.2 SIV-EF1a慢病毒包装 | 第62页 |
| 4.3.2.3 SIV-PGK慢病毒包装 | 第62-63页 |
| 4.3.3 不同慢病毒对不同细胞的感染 | 第63-66页 |
| 4.3.3.1 SIV慢病毒对小鼠胚胎干细胞的感染 | 第63-64页 |
| 4.3.3.2 pTomo慢病毒对树鼩睾丸体细胞的感染 | 第64-65页 |
| 4.3.3.3 S1V慢病毒对树鼩原代精原：干细胞的感染 | 第65页 |
| 4.3.3.4 SIV-EF1a慢病毒对树鼩原代精原干细胞的感染 | 第65-66页 |
| 4.3.3.5 SIV-PGK慢病毒对树鼩原代精原干细胞的感染 | 第66页 |
| 4.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 转基因树鼩精原干细胞系的应用验证 | 第68-82页 |
| 5.1 引言 | 第68页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第68-79页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第68页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第68-69页 |
| 5.2.3 实验试剂的配制方法 | 第69-71页 |
| 5.2.4 实验器材 | 第71-72页 |
| 5.2.5 实验设计 | 第72-79页 |
| 5.2.5.1 慢病毒转染构建转基因树鼩精原干细胞系 | 第72页 |
| 5.2.5.2 移植树鼩精子检测 | 第72-73页 |
| 5.2.5.3 子代树鼩EGFP的PCR检测 | 第73-75页 |
| 5.2.5.4 子代树鼩EGFP的蛋白检测 | 第75-79页 |
| 5.3 实验结果 | 第79-81页 |
| 5.3.1 移植树鼩精子DNA检测 | 第79-80页 |
| 5.3.2 子代树鼩EGFP的检测 | 第80-81页 |
| 5.3.2.1 子代树鼩组织DNA样品的PCR检测 | 第80-81页 |
| 5.3.3 蛋白检测结果 | 第81页 |
| 5.4 讨论 | 第81-82页 |
| 第六章 结论 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-95页 |
