摘要 | 第7-8页 |
缩略语表 | 第8-9页 |
1.引言 | 第9-17页 |
1.1 花色苷的结构与种类 | 第9-10页 |
1.2 花色苷的稳定性 | 第10-11页 |
1.3 花色苷的功能 | 第11-12页 |
1.3.1 花色苷的生理功能 | 第11-12页 |
1.3.2 花色苷对人体的保健功能 | 第12页 |
1.4 花色苷的生物合成 | 第12-14页 |
1.5 UFGT | 第14-15页 |
1.6 UV-C | 第15页 |
1.7 课题研究目的及意义 | 第15-17页 |
2.材料与方法 | 第17-29页 |
2.1 实验材料 | 第17页 |
2.2 实验仪器 | 第17页 |
2.3 实验试剂 | 第17-18页 |
2.4 试剂配置 | 第18-20页 |
2.4.1 总RNA提取药品配置方法 | 第18页 |
2.4.2 1%琼脂糖凝胶电泳试剂配置 | 第18-19页 |
2.4.3 蛋白质电泳溶液配置 | 第19页 |
2.4.4 western blot试剂 | 第19-20页 |
2.5 试验方法 | 第20-29页 |
2.5.1 总RNA提取 | 第20-21页 |
2.5.2 RNA纯度测定 | 第21页 |
2.5.3 ufgt基因的RT-PCR扩增与纯化 | 第21-22页 |
2.5.4 克隆载体的构建 | 第22-23页 |
2.5.5 表达载体pET-ufgt的构建及转化 | 第23-24页 |
2.5.6 UFGT蛋白优化表达 | 第24-25页 |
2.5.7 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第25页 |
2.5.8 UFGT蛋白的纯化 | 第25-26页 |
2.5.9 制备抗体 | 第26页 |
2.5.10 实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
2.5.11 葡萄果实蛋白的提取和Western blotting分析 | 第27-28页 |
2.5.12 UFGT酶活的测定 | 第28-29页 |
2.5.13 花色苷含量的测定 | 第29页 |
2.5.14 数据分析 | 第29页 |
3.结果与分析 | 第29-40页 |
3.1 葡萄果实总RNA的提取 | 第29-30页 |
3.2 ufgt基因的RT-PCR扩增 | 第30-31页 |
3.3 克隆载体pMD-ufgt的构建 | 第31页 |
3.3.1 菌液PCR鉴定 | 第31页 |
3.3.2 ufgt基因测序序列结果和分析 | 第31页 |
3.4 UFGT蛋白信息分析 | 第31-34页 |
3.4.1 UFGT蛋白一级结构及基本信息 | 第31页 |
3.4.2 UFGT蛋白信号肽分析 | 第31-32页 |
3.4.3 UFGT蛋白跨膜结构 | 第32页 |
3.4.4 UFGT蛋白二级结构 | 第32-33页 |
3.4.5 UFGT蛋白同源性分析 | 第33-34页 |
3.5 表达载体pET-ufgt的构建 | 第34页 |
3.5.1 pET-ufgt重组质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
3.5.2 ufgt基因测序序列结果和分析 | 第34页 |
3.6 UFGT蛋白表达的诱导 | 第34-37页 |
3.6.1 蛋白表达温度的优化 | 第34-35页 |
3.6.2 IPTG诱导剂浓度的优化 | 第35-36页 |
3.6.3 蛋白诱导时间的优化 | 第36-37页 |
3.7 UV-C照射对葡萄果实ufgt基因表达的影响 | 第37页 |
3.8 UV-C照射对葡萄果实UFGT蛋白含量的影响 | 第37-38页 |
3.9 UV-C照射对葡萄果实UFGT酶活性的影响 | 第38-39页 |
3.10 UV-C照射对葡萄果实花色苷含量的影响 | 第39页 |
3.11 UV-C照射下花色苷含量与ufgt基因表达、蛋白含量、酶活性的相关性分析 | 第39-40页 |
4.讨论 | 第40-41页 |
5.结论 | 第41-43页 |
参考文献 | 第43-47页 |
Abstract | 第47页 |
附录 | 第49-57页 |
致谢 | 第57页 |