| 致谢 | 第1-5页 |
| 本课题受以下基金资助 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 论文创新点 | 第8-12页 |
| 1 引言 | 第12-14页 |
| 2 试剂与器材 | 第14-17页 |
| ·实验动物及细胞株 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-15页 |
| ·实验仪器和器材 | 第15页 |
| ·小鼠ES细胞定向分化为IP细胞用溶液 | 第15-17页 |
| ·细胞培养液 | 第15-16页 |
| ·其他溶液 | 第16-17页 |
| 3 实验方法 | 第17-25页 |
| ·小鼠ES细胞体外定向分化为IP细胞分化步骤 | 第17-19页 |
| ·MEF细胞培养 | 第17页 |
| ·饲养层制备 | 第17页 |
| ·ES细胞的支持培养和传代 | 第17-18页 |
| ·ES细胞定向分化为IP细胞 | 第18-19页 |
| ·分化细胞鉴定 | 第19-20页 |
| ·细胞形态光镜观察 | 第19页 |
| ·双硫腙(dithizone,DTZ)染色法 | 第19-20页 |
| ·免疫细胞化学法检测胰岛β细胞相关蛋白表达 | 第20页 |
| ·流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测阳性细胞分化率 | 第20-21页 |
| ·酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中胰岛素分泌量 | 第21页 |
| ·Western-blot法检测蛋白表达 | 第21-22页 |
| ·逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测基因表达 | 第22-24页 |
| ·JC.1染色检测线粒体发生及膜电位维持 | 第24页 |
| ·统计处理 | 第24-25页 |
| 4 小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞模型确立 | 第25-34页 |
| ·实验结果 | 第25-31页 |
| ·小鼠ES细胞培养和分化形态学特征 | 第25-26页 |
| ·小鼠ES细胞 | 第25页 |
| ·EBs的形成 | 第25页 |
| ·自发分化形成的各胚层细胞 | 第25页 |
| ·分化终点细胞 | 第25-26页 |
| ·DTZ染色法鉴定ES细胞衍生5+28d分化终点细胞 | 第26-27页 |
| ·免疫荧光法鉴定ES细胞衍生5+28d分化终点细胞 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR检测ES细胞分化过程中胰岛β细胞相关基因表达 | 第28-29页 |
| ·FCM检测ES细胞衍生胰岛素阳性细胞分化率 | 第29页 |
| ·ELISA法检测ES细胞分化终点细胞对葡萄糖敏感的胰岛素分泌量 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| ·结论 | 第33-34页 |
| 5 小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞过程中线粒体发生及PPARs的调控 | 第34-43页 |
| ·实验结果 | 第34-40页 |
| ·JC-1染色法检测分化过程中细胞线粒体△Ψm变化 | 第34-36页 |
| ·FCM检测分化终点细胞PPARs和insulin共表达率 | 第36页 |
| ·Western-blot法检测分化过程中PPARs各亚型相关蛋白表达 | 第36-37页 |
| ·PPARs激动剂和拮抗剂对分化早期和终点细胞△Ψm影响 | 第37-38页 |
| ·PPARs激动剂和拮抗剂对分化终点insulin阳性细胞率的影响 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·结论 | 第42-43页 |
| 6 附,PPARs各亚型在大鼠原代肝细胞中的表达情况 | 第43-47页 |
| ·研究目的 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·液体配置 | 第43-44页 |
| ·操作步骤 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-46页 |
| ·结论 | 第46-47页 |
| 7 参考文献 | 第47-51页 |
| 综述 | 第51-65页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第65页 |
