| 符号说明 | 第1-9页 |
| 第一部分：毛白杨PTMADS5基因遗传转化 | 第9-36页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-16页 |
| ·MADS-BOX基因研究进展 | 第11-12页 |
| ·MADS-BOX基因的起源和分类 | 第11页 |
| ·MADS-BOX基因的结构 | 第11-12页 |
| ·植物MADS-BOX基因与花发育ABC模型 | 第12-13页 |
| ·花发育与ABC模型 | 第12-13页 |
| ·花形态突变与MADS-BOX基因 | 第13页 |
| ·MADS-BOX基因的功能 | 第13-16页 |
| ·植物Ⅰ型MADS-BOX基因功能 | 第14页 |
| ·植物Ⅱ型MADS-BOX基因功能 | 第14-16页 |
| ·与花发育相关MADS-BOX基因的功能 | 第14-15页 |
| ·与其他器官发育相关的MADS-BOX基因的功能 | 第15-16页 |
| ·本研究意义 | 第16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-21页 |
| ·实验材料 | 第16页 |
| ·植物材料 | 第16页 |
| ·菌株和质粒 | 第16页 |
| ·酶和生化试剂 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-21页 |
| ·Trizol法提取总RNA | 第16-17页 |
| ·目的基因的分离 | 第17-19页 |
| ·反转录c DNA第一链的合成 | 第17页 |
| ·纯化及加尾 | 第17页 |
| ·中间片段的获得 | 第17-18页 |
| ·3′ RACE PCR和 5′ RACE PCR | 第18页 |
| ·全长目的基因扩增 | 第18页 |
| ·连接转化 | 第18-19页 |
| ·序列测定和分析 | 第19页 |
| ·表达载体的构建和转化农杆菌 | 第19-20页 |
| ·中间载体构建 | 第19-20页 |
| ·表达载体构建 | 第20页 |
| ·农杆菌GV3101介导的毛白杨遗传转化 | 第20-21页 |
| ·毛白杨植株组织培养及遗传转化所用到的培养基 | 第20页 |
| ·农杆菌菌液制备 | 第20页 |
| ·叶盘法转化毛白杨程序 | 第20-21页 |
| ·Pt MADS5基因的表达分析及转基因植株的检测 | 第21页 |
| ·RT-PCR检测Pt MADS5基因的表达分析 | 第21页 |
| ·Pt MADS5转基因植株的RT-PCR检测 | 第21页 |
| 3 结果与分析 | 第21-30页 |
| ·毛白杨MADS-BOX基因的克隆与序列分析 | 第21-22页 |
| ·PTMADS5全长序列与同源性分析 | 第22-27页 |
| ·PTMADS5基因在毛白杨植株不同部位的表达分析 | 第27页 |
| ·PTMADS5基因表达载体的构建 | 第27-29页 |
| ·Pt MADS5转基因植株形态 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-31页 |
| ·PTMADS5的序列 | 第30页 |
| ·PTMADS5基因的功能 | 第30-31页 |
| 5 结论 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-36页 |
| 第二部分：CRISPR-CAS9植物基因敲除实验 | 第36-83页 |
| 中文摘要 | 第36-37页 |
| ABSTRACT | 第37-38页 |
| 1 引言 | 第38-53页 |
| ·基因组编辑技术 | 第38-39页 |
| ·归巢核酸酶 | 第39页 |
| ·锌指核酸酶技术 | 第39-41页 |
| ·ZFNS的结构和原理 | 第39-40页 |
| ·ZFNS技术的应用发展 | 第40-41页 |
| ·TALE核酸酶技术 | 第41-43页 |
| ·TALENS结构及技术原理 | 第41-43页 |
| ·TALENS技术的应用 | 第43页 |
| ·CRISPR-CAS9系统 | 第43-52页 |
| ·CRISPR-CAS9的结构 | 第44-46页 |
| ·CRISPR-CAS9的作用机理 | 第46-47页 |
| ·SGRNA-CAS9系统的构建 | 第47-49页 |
| ·CRISPR-CAS 9 的应用 | 第49-51页 |
| ·CRISPR-CAS 9 技术展望 | 第51-52页 |
| ·研究的目的及意义 | 第52-53页 |
| 2 材料与方法 | 第53-61页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·植物材料 | 第53页 |
| ·菌株与质粒 | 第53页 |
| ·酶和生化试剂 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-61页 |
| ·拟南芥愈伤组织培养 | 第53-54页 |
| ·无菌苗的获得 | 第53页 |
| ·培养条件 | 第53页 |
| ·愈伤组织诱导 | 第53-54页 |
| ·载体构建 | 第54-58页 |
| ·表达载体构建 | 第54-58页 |
| ·农杆菌转化 | 第58-59页 |
| ·愈伤组织侵染步骤 | 第59页 |
| ·抗生素对愈伤组织生长的抑制作用 | 第59页 |
| ·转基因植株基因敲除检测 | 第59-61页 |
| ·拟南芥基因组DNA提取 | 第59-60页 |
| ·敲除基因检测 | 第60页 |
| ·目的片段连接测序 | 第60-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-70页 |
| ·叶片诱导愈伤组织 | 第61-62页 |
| ·敲除AG基因载体构建 | 第62-64页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化条件 | 第64-67页 |
| ·抗生素筛选浓度的确定 | 第64-65页 |
| ·预培养时间对转化效率的影响 | 第65页 |
| ·农杆菌菌液浓度及侵染时间对转化效率的影响 | 第65-66页 |
| ·共培养时间对遗传转化效率的影响 | 第66-67页 |
| ·基因敲除突变体 | 第67-70页 |
| ·基因敲除突变体的检测 | 第67页 |
| ·突变体突变位置的变化 | 第67-70页 |
| ·不同突变体的突变长度的筛选 | 第67-68页 |
| ·突变体的突变核酸序列 | 第68-70页 |
| ·正常的基因编辑 | 第68-69页 |
| ·含有额外序列插入的突变 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| ·基因敲除遗传转化的条件 | 第70-71页 |
| ·CRISPR-CAS9植物基因组编辑系统 | 第71-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 附录 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况及主要研究成果 | 第87页 |
