| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-15页 |
| ·甲壳纲十足目精子非浓缩核研究进展 | 第10-11页 |
| ·对河蟹精子非浓缩核的新理解 | 第11页 |
| ·组蛋白变体H3.3基因特征 | 第11-12页 |
| ·组蛋白变体H3.3的功能 | 第12-15页 |
| 第2章 河蟹精巢组蛋白变体H3.3基因克隆及基因特征分析 | 第15-31页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| ·材料与试剂 | 第16-17页 |
| ·实验材料 | 第16页 |
| ·实验仪器与试剂 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-22页 |
| ·引物设计与合成 | 第17页 |
| ·河蟹精巢RNA的提取 | 第17页 |
| ·总RNA的完整性及纯度检测 | 第17-18页 |
| ·河蟹精巢组蛋白变体H3.3基因片段特殊区的获得 | 第18-19页 |
| ·H3.3基因的3′ RACE扩增 | 第19-21页 |
| ·H3.3基因的5′ RACE扩增 | 第21页 |
| ·H3.3基因全长序列的获得 | 第21页 |
| ·基因组扩增H3.3基因 | 第21-22页 |
| ·河蟹组蛋白变体H3.3基因与正常H3基因特征分析 | 第22页 |
| ·实验结果 | 第22-29页 |
| ·河蟹总RNA的提取结果 | 第22-23页 |
| ·H3.3基因特殊区结果 | 第23-24页 |
| ·3’race结果 | 第24页 |
| ·5’race结果 | 第24-25页 |
| ·拼接后H3.3 基因全长 | 第25-27页 |
| ·H3.3基因组克隆结果 | 第27页 |
| ·H3.3基因组序列 | 第27-28页 |
| ·组蛋白H3基因拼接全长结果 | 第28页 |
| ·河蟹组蛋白H3及其变体H3.3 氨基酸序列 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 第3章 河蟹组蛋白变体H3.3原核表达及内源精子核中表达特征 | 第31-40页 |
| 引言 | 第31页 |
| ·实验材料与试剂 | 第31-32页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·主要实验仪器与试剂 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-34页 |
| ·H3.3组蛋白编码区酶切位点的引入 | 第32-33页 |
| ·中华绒螯蟹组蛋白变体H3.3基因表达载体构建 | 第33页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| ·组蛋白变体H3.3的纯化 | 第33-34页 |
| ·实验结果 | 第34-38页 |
| ·H3.3编码区引入酶切位点 | 第34页 |
| ·H3.3编码区引入酶切位点PCR产物纯化结果 | 第34-35页 |
| ·H3.3组蛋白表达载体构建结果 | 第35页 |
| ·融合蛋白诱导表达结果 | 第35-36页 |
| ·包涵体中组蛋白H3.3 纯化结果 | 第36页 |
| ·精子核中组蛋白RT-PCR结果 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第4章 Western blot检测抗体特异性 | 第40-44页 |
| 引言 | 第40页 |
| ·实验材料与试剂 | 第40-41页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-42页 |
| ·外源性Western blot检测 | 第41-42页 |
| ·精子核碱性蛋白Western blot | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 第5章 河蟹成熟精子中组蛋白H1和H1变体的相对定量 | 第44-53页 |
| 引言 | 第44页 |
| ·材料与试剂 | 第44-45页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·仪器与试剂 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·河蟹精子悬液的制备 | 第45页 |
| ·精子RNA提取 | 第45-46页 |
| ·精子RNA的稀释 | 第46页 |
| ·荧光定量PCR的反转录反应 | 第46页 |
| ·标准曲线的制作 | 第46-47页 |
| ·荧光定量PCR的扩增 | 第47页 |
| ·实验结果 | 第47-50页 |
| ·标准曲线制作结果 | 第47-48页 |
| ·H1变体和H1正常相对定量结果 | 第48-49页 |
| ·2-??Ct算得H1正常和H1变体在成熟精子中相对定量 | 第49-50页 |
| ·H1变体编码区序列分析 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第59页 |
