| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-15页 |
| 第2章 材料与方法 | 第15-32页 |
| ·实验材料 | 第15-17页 |
| ·细胞株 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·主要仪器与设备 | 第16-17页 |
| ·实验器材、试剂和溶液的准备 | 第17-20页 |
| ·细胞培养用品的处理 | 第17-18页 |
| ·去RNA酶处理 | 第18页 |
| ·Ham’s F-12K培养基的配制 | 第18页 |
| ·LPS溶液的配制 | 第18页 |
| ·PTEN si RNA及Control siRNA相关试剂的配制 | 第18-19页 |
| ·Western Blot相关试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-32页 |
| ·NR8383的复苏、培养、传代和冻存 | 第20页 |
| ·细胞处理及分组 | 第20-21页 |
| ·RNA提取、定量和质量检测 | 第21-23页 |
| ·SYBR Green I实时荧光定量PCR检测PTEN m RNA及TNF-αmRNA的表达 | 第23-25页 |
| ·Western blot检测PTEN、p-AKT蛋白的表达变化 | 第25-28页 |
| ·ELISA检测上清中TNF-α蛋白的表达 | 第28-31页 |
| ·统计学处理 | 第31-32页 |
| 第3章 结果 | 第32-39页 |
| ·细胞总RNA质量和浓度测定 | 第32页 |
| ·RT-qPCR扩增的特异性 | 第32-34页 |
| ·BCA蛋白定量 | 第34页 |
| ·SYBR Green I Real-Time qPCR检测转染PTEN siRNA、Control siRNA后细胞内PTEN mRNA表达变化，选择最佳转染浓度 | 第34-35页 |
| ·Western blot检测转染PTEN siRNA、Control si RNA后细胞内PTEN蛋白表达变化，选择最佳转染浓度 | 第35-36页 |
| ·下调PTEN对NR8383细胞靶蛋白AKT磷酸化水平的影响 | 第36页 |
| ·下调PTEN后对NR8383细胞TNF-α mRNA相对表达的影响 | 第36-37页 |
| ·大鼠TNF-α蛋白标准曲线图 | 第37页 |
| ·下调PTEN后对NR8383细胞上清液中TNF-α蛋白表达的影响 | 第37-39页 |
| 第4章 讨论 | 第39-43页 |
| 第5章 结论与展望 | 第43-44页 |
| ·结论 | 第43页 |
| ·进一步工作的方向 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第49-50页 |
| 综述 | 第50-56页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
