| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 英文缩写说明 | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-18页 |
| ·近等基因系的概念及水稻抗病基因NILs的研究应用 | 第11页 |
| ·水稻稻瘟病的研究进展 | 第11-12页 |
| ·稻瘟病菌的危害和作用机制 | 第11-12页 |
| ·水稻稻瘟病抗性基因的克隆 | 第12页 |
| ·植物候选相关功能基因的研究进展 | 第12-14页 |
| ·过氧化物酶基因 | 第13页 |
| ·卤代酸脱卤酶样水解酶的基因 | 第13-14页 |
| ·谷胱甘肽-S-转移酶基因 | 第14页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第14-16页 |
| ·实时荧光定量PCR概念和原理 | 第14-15页 |
| ·实时定量PCR在植物研究中的应用 | 第15-16页 |
| ·RACE技术 | 第16页 |
| ·RACE概念和原理 | 第16页 |
| ·RACE技术在植物研究中的应用 | 第16页 |
| ·选题依据和研究内容 | 第16-18页 |
| ·选题依据 | 第17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 基因表达量初步分析 | 第18-26页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-21页 |
| ·水稻幼苗接种及叶片采集 | 第18-19页 |
| ·水稻幼苗接种方法 | 第18-19页 |
| ·叶片采集 | 第19页 |
| ·水稻叶片总RNA的提取 | 第19页 |
| ·荧光定量引物设计 | 第19-20页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第20-21页 |
| ·cDNA的合成 | 第20-21页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第21页 |
| ·结果与讨论 | 第21-24页 |
| ·提取RNA的质量分析 | 第22页 |
| ·目的基因在感、抗近等基因系材料的表达特异性 | 第22-24页 |
| ·OsPRX2的表达特异性 | 第22-23页 |
| ·OsHAD4的表达特异性 | 第23-24页 |
| ·OsGST5的表达特异性 | 第24页 |
| ·小结 | 第24-26页 |
| 第三章 候选基因的克隆及序列分析 | 第26-46页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-35页 |
| ·扩增候选基因编码区全长 | 第26-30页 |
| ·提取叶片总RNA | 第26页 |
| ·cDNA的合成 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·目的片段的扩增及回收 | 第27-28页 |
| ·目的片段与CloneJET PCR cloning kit的载体连接 | 第28-29页 |
| ·采用CaCl_2法将连接产物转化E. coli DH 5α感受态细胞 | 第29-30页 |
| ·测序及序列分析 | 第30页 |
| ·候选基因在近等基因系感抗材料启动子区的克隆 | 第30-33页 |
| ·提取叶片总DNA | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·目的片段扩增及回收 | 第31-32页 |
| ·目的片段与pMD18-T载体连接 | 第32-33页 |
| ·采用CaCl_2法将连接产物转化E.coli DH 5α感受态细胞 | 第33页 |
| ·测序及序列分析 | 第33页 |
| ·用RACE方法扩增抗病材料目的基因的cDNA全长 | 第33-35页 |
| ·提取叶片总RNA | 第33页 |
| ·cDNA的合成 | 第33-34页 |
| ·目的基因RACE引物设计 | 第34页 |
| ·目的基因5'UTR及3'UTR的扩增及回收 | 第34-35页 |
| ·目的片段与载体的连接及转化 | 第35页 |
| ·测序及序列分析 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-44页 |
| ·感、抗材料间中目的基因的编码区克隆及序列比对 | 第35-38页 |
| ·感、抗材料间中目的基因的启动子区克隆及序列比对 | 第38-41页 |
| ·抗病材料中目的基因5'UTR及3'UTR的扩增 | 第41-43页 |
| ·抗病材料中目的基因的生物信息学和进化分析 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-46页 |
| 第四章 候选基因植物过量表达载体和干扰表达载体的构建及遗传转化 | 第46-61页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌种与质粒 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-56页 |
| ·候选基因目的片段的扩增及回收 | 第47-48页 |
| ·目的片段与载体的连接及转化 | 第48页 |
| ·目的片段测序及序列分析 | 第48页 |
| ·候选基因的植物过表达载体构建 | 第48-52页 |
| ·pCAMBIA 1303空载体的制备 | 第48-49页 |
| ·含有候选基因过表达片段的阳性质粒及pCAMBIA 1303/1301植物表达载体的双酶切 | 第49-50页 |
| ·目的片段和pCAMBIA 1303/1301酶切产物的回收 | 第50页 |
| ·目的片段与载体片段的连接 | 第50页 |
| ·连接产物的转化 | 第50页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第50-51页 |
| ·冻融法将过表达载体质粒转化农杆菌 | 第51-52页 |
| ·候选基因的植物RNA干扰载体构建 | 第52-55页 |
| ·候选基因的植物RNA干扰载体第一联构建 | 第52-53页 |
| ·含有候选基因过表达片段的阳性质粒及pTCK303植物表达载体的双酶切 | 第52页 |
| ·目的片段和pTCK303酶切产物的回收 | 第52页 |
| ·目的片段与载体片段的连接 | 第52页 |
| ·连接产物的转化 | 第52-53页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第53页 |
| ·候选基因的植物RNA干扰载体第二联构建 | 第53-55页 |
| ·RNA干扰载体第一联质粒的制备 | 第53页 |
| ·含有候选基因过表达片段的阳性质粒及RNA干扰载体第一联的双酶切 | 第53-54页 |
| ·目的片段和pTCK303酶切产物的回收 | 第54页 |
| ·目的片段与载体片段的连接 | 第54页 |
| ·连接产物的转化 | 第54页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第54-55页 |
| ·冻融法将干扰载体质粒转化农杆菌 | 第55页 |
| ·农杆菌介导水稻的遗传转化 | 第55-56页 |
| ·消毒 | 第55页 |
| ·愈伤组织的诱导与继代 | 第55-56页 |
| ·抗性愈伤组织的分化和炼苗 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-60页 |
| ·侯选基因植物过量表达载体的构建 | 第56-58页 |
| ·OsPRX2、OsGST5植物过表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·OsHAD4植物过表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·侯选基因植物干扰表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·水稻的遗传转化 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 全文总结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 附录Ⅰ 几种主要的培养基配方 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简历 | 第71页 |
