| 中文摘要 | 第1-16页 |
| 英文摘要 | 第16-18页 |
| 缩略语说明 | 第18-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-41页 |
| 第一节 凋亡和自噬细胞信号转导的分子机制 | 第20-31页 |
| 一、细胞凋亡 | 第20-28页 |
| 1. 细胞凋亡的概念及特征 | 第20页 |
| 2. 细胞凋亡的调控因素及信号转导途径 | 第20-28页 |
| ·Caspase与细胞凋亡 | 第20-21页 |
| ·线粒体途径与细胞凋亡 | 第21页 |
| ·Cytochrome c与细胞凋亡 | 第21页 |
| ·Bcl-2家族在凋亡中的作用 | 第21-22页 |
| ·PI3K-Akt/PKB信号转导途径 | 第22-23页 |
| ·MAPK信号转导途径 | 第23-25页 |
| ·p53蛋白 | 第25-26页 |
| ·NF-κB-COX-2信号通路 | 第26-28页 |
| 二、细胞自噬 | 第28-31页 |
| 1. 自噬的特征及功能 | 第28页 |
| 2. 自噬过程的信号调控 | 第28-30页 |
| ·mTOR对自噬的作用 | 第28-29页 |
| ·PI3K/Akt通路对自噬的调控 | 第29页 |
| ·活性氧对自噬的调控 | 第29-30页 |
| 3. 自噬与凋亡 | 第30-31页 |
| ·自噬与凋亡相互促进 | 第30-31页 |
| ·自噬与凋亡相互拮抗 | 第31页 |
| 第二节 肝细胞生长因子受体调节凋亡和自噬的机制研究 | 第31-32页 |
| 1. 肝细胞生长因子受体的分子结构和功能 | 第31页 |
| 2. c-Met抗凋亡和自噬的作用机制 | 第31-32页 |
| 第三节 c-Met小分子特异性抑制剂SU11274的研究进展 | 第32-34页 |
| 1. SU11274分子结构和功能 | 第32-33页 |
| 2. SU11274的作用机制 | 第33-34页 |
| ·c-Met下游Ras通路的激活 | 第33页 |
| ·c-Met下游PI3K通路的激活 | 第33页 |
| ·c-Met与其它膜受体的交叉活化途径 | 第33-34页 |
| 第四节 冬凌草甲素分子药理机制研究进展 | 第34-36页 |
| 1. 抗菌抗炎作用 | 第34页 |
| 2. 抗肿瘤作用 | 第34-35页 |
| ·阻滞细胞周期 | 第34-35页 |
| ·诱导肿瘤细胞凋亡 | 第35页 |
| 3 抗氧化作用 | 第35页 |
| 4 其它作用 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-41页 |
| 第二章 SU11274诱导A549细胞自噬和活性氧生成的机制研究 | 第41-76页 |
| 第一节 SU11274诱导A549细胞自噬的机制研究 | 第42-59页 |
| 一、材料和方法 | 第42-48页 |
| 1. 实验材料 | 第42-43页 |
| ·细胞培养 | 第42页 |
| ·药品及试剂 | 第42-43页 |
| ·仪器 | 第43页 |
| 2. 实验方法 | 第43-48页 |
| ·细胞爬片制作 | 第43页 |
| ·免疫细胞化学实验 | 第43-44页 |
| ·细胞生长抑制测定 | 第44页 |
| ·MDC荧光染色观察细胞形态 | 第44页 |
| ·流式细胞术分析细胞自噬率 | 第44页 |
| ·siRNA转染 | 第44页 |
| ·GFP-LC3转染 | 第44-45页 |
| ·Western blot analysis(蛋白免疫印迹法) | 第45-48页 |
| ·工作液的配制 | 第45页 |
| ·蛋白质电泳 | 第45-46页 |
| ·免疫印迹 | 第46-48页 |
| ·统计学分析 | 第48页 |
| 二、实验结果 | 第48-56页 |
| 1. 免疫染色法检测A549细胞表面c-Met的存在 | 第48页 |
| 2. SU11274时间和剂量依赖性诱导A549细胞自噬 | 第48-49页 |
| 3. 蛋白免疫印迹法分析SU11274诱导细胞自噬 | 第49-50页 |
| 4. c-Met参与SU11274诱导的自噬 | 第50-51页 |
| 5. HGF逆转SU11274诱导的自噬的发生 | 第51页 |
| 6. 抑制自噬降低SU11274诱导A549细胞死亡 | 第51-53页 |
| 7. ERK-p53参与调节SU11274诱导的A549细胞自噬 | 第53-55页 |
| 8. ERK通过促进Bcl-2磷酸化增强SU11274诱导的自噬 | 第55-56页 |
| 讨论 | 第56-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 第二节 SU11274诱导A549细胞ROS生成的机制研究 | 第59-73页 |
| 一、材料和方法 | 第59-61页 |
| 1. 实验材料 | 第59-60页 |
| ·细胞培养 | 第59页 |
| ·秀丽隐杆线虫的培养 | 第59页 |
| ·药品及试剂 | 第59-60页 |
| ·仪器 | 第60页 |
| 2. 实验方法 | 第60-61页 |
| ·细胞培养 | 第60页 |
| ·MTT法分析生长抑制率 | 第60页 |
| ·ROS阳性细胞比率测定 | 第60页 |
| ·线虫荧光染色 | 第60-61页 |
| ·MDC荧光染色观察细胞形态 | 第61页 |
| ·流式细胞术分析细胞自噬率 | 第61页 |
| ·siRNA转染 | 第61页 |
| ·GFP-LC3转染 | 第61页 |
| ·Western blot analysis | 第61页 |
| ·统计学方法 | 第61页 |
| 二、实验结果 | 第61-70页 |
| 1.SU11274时间依赖性地诱导A549细胞ROS生成 | 第61-62页 |
| 2. SU11274诱导ROS以O_2~(·-)和H_2O_2形式存在 | 第62-64页 |
| 3. 清除O_2~(·-)和H_2O_2促进SU11274诱导的A549细胞生长抑制 | 第64-65页 |
| 4. 清除O_2~(·-)和H_2O_2促进SU11274诱导的A549细胞自噬 | 第65-67页 |
| 5. O_2~(·-)和H_2O_2促进c-Met的表达及其下游途径的激活 | 第67-68页 |
| 6. 抑制c-Met及PI3K-Akt和SOS/Grb2-Ras-p38途径诱导自噬及生长抑制 | 第68-70页 |
| 讨论 | 第70-72页 |
| 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 第三章 c-Met参与冬凌草甲素诱导A549细胞死亡的调节机制研究 | 第76-100页 |
| 一、材料和方法 | 第76-79页 |
| 1. 实验材料 | 第76-77页 |
| ·细胞 | 第76页 |
| ·药品及试剂 | 第76-77页 |
| ·仪器 | 第77页 |
| 2. 实验方法 | 第77-79页 |
| ·细胞培养 | 第77页 |
| ·MTT法分析细胞生长抑制率 | 第77页 |
| ·免疫印迹法检测蛋白表达 | 第77页 |
| ·细胞形态学观察 | 第77-78页 |
| ·荧光显微镜观察细胞核的形态变化 | 第78页 |
| ·流式细胞仪检测SubG0/G_1凋亡峰 | 第78页 |
| ·流式细胞术分析细胞自噬率 | 第78页 |
| ·线粒体膜电位的检测 | 第78页 |
| ·线粒体和胞浆提取物的制备 | 第78-79页 |
| ·siRNA转染 | 第79页 |
| ·GFP-LC3转染 | 第79页 |
| ·统计学分析 | 第79页 |
| 二、实验结果 | 第79-96页 |
| 1. 冬凌草甲素诱导A549细胞凋亡 | 第79-80页 |
| 2. 抑制c-Met促进冬凌草甲素诱导的A549细胞凋亡 | 第80-83页 |
| 3 抑制c-Met促进冬凌草甲素引起的线粒体膜电位的下降 | 第83-85页 |
| 4. 抑制c-Met促进冬凌草甲素介导的ERK和p53的激活 | 第85-86页 |
| 5. ERK和p53参与了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制 | 第86-88页 |
| 6. ERK-p53参与了冬凌草甲素介导的线粒体途径所诱导的凋亡 | 第88-89页 |
| 7. 抑制c-Met促进自噬 | 第89-93页 |
| 8. 自噬和凋亡协同促进细胞死亡 | 第93-96页 |
| 讨论 | 第96-97页 |
| 小结 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-100页 |
| 第四章 HGF抑制冬凌草甲素诱导A549细胞凋亡的机制研究 | 第100-119页 |
| 第一节 HGF研究进展 | 第100-101页 |
| 一、HGF的生物学功能 | 第100页 |
| 二、HGF在NSCLC发生发展中的作用 | 第100-101页 |
| 第二节 HGF抑制冬凌草甲素诱导A549细胞凋亡的机制研究 | 第101-114页 |
| 一、材料和方法 | 第101-103页 |
| 1. 实验材料 | 第101页 |
| ·细胞 | 第101页 |
| ·药品及试剂 | 第101页 |
| ·仪器 | 第101页 |
| 2. 实验方法 | 第101-103页 |
| ·细胞培养 | 第102页 |
| ·MTT法分析细胞生长抑制率 | 第102页 |
| ·免疫印迹法检测蛋白表达 | 第102页 |
| ·细胞形态学观察 | 第102页 |
| ·Hoechst33258荧光染色 | 第102页 |
| ·乳酸脱氢酶(LDH)活力测定 | 第102页 |
| ·PI/Rhodamine123双染检测线粒体膜电位的下降 | 第102-103页 |
| ·前列腺素(PGE_2)含量检测 | 第103页 |
| ·统计学分析 | 第103页 |
| 二、实验结果 | 第103-114页 |
| 1. 冬凌草甲素对A549细胞的生长抑制作用 | 第103页 |
| 2. 冬凌草甲素诱导A549细胞发生凋亡 | 第103-104页 |
| 3 HGF逆转了冬凌草甲素诱导的A549细胞凋亡 | 第104-105页 |
| 4. HGF抑制冬凌草甲素诱导的A549细胞线粒体膜电位的下降 | 第105-106页 |
| 5. HGF逆转冬凌草甲素诱导的c-Met蛋白表达的下降 | 第106-107页 |
| 6. NF-κB-COX-2途径对HGF逆转冬凌草甲素诱导A549细胞凋亡的影响 | 第107-109页 |
| 7. HGF逆转冬凌草甲素抑制PGE_2生成的作用 | 第109-110页 |
| 8. Bcl-2/Bax对HGF逆转冬凌草甲素诱导A549细胞凋亡的影响 | 第110-111页 |
| 9. NF-κB和COX-2对Bcl-2/Bax比率的影响 | 第111-112页 |
| 10. NF-κB和COX-2对caspase-3蛋白表达的影响 | 第112-113页 |
| 11. iPLA2参与HGF逆转冬凌草甲素诱导的A549细胞凋亡 | 第113-114页 |
| 讨论 | 第114-116页 |
| 小结 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 附录 | 第120-140页 |
