| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 参环毛蚓相关研究概况 | 第13-16页 |
| ·参环毛蚓物利鉴定的依据和方法 | 第13-14页 |
| ·参环毛蚓活性成分及功效 | 第14-15页 |
| ·参环毛蚓药材资源和药材品质的现状 | 第15-16页 |
| 2 蚯蚓重金属富集研究现状 | 第16-20页 |
| ·重金属富集问题的发现 | 第16-17页 |
| ·动物富集重金属的机理 | 第17-18页 |
| ·研究重金属富集机理常用的方法 | 第18-20页 |
| 3 研究小结 | 第20-22页 |
| ·本研究工作的立题依据 | 第20-21页 |
| ·本研究工作研究方法 | 第21页 |
| ·本研究工作技术路线图 | 第21-22页 |
| 第二部分 研究内容 | 第22-72页 |
| 第一章 参环毛蚓 MT-2 基因 mRNA 表达丰度的快速分析 | 第22-35页 |
| 1 引言 | 第22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-27页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| 3 实验结果 | 第27-32页 |
| ·重金属胁迫下参环毛蚓耐性分析 | 第27-28页 |
| ·总RNA提取效果检测 | 第28页 |
| ·参环毛蚓MT-2基因PCR体系的构建 | 第28-29页 |
| ·参环毛蚓应对重金属胁迫的mRNA丰度分析 | 第29-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| ·重金属胁迫浓度的确立 | 第32-33页 |
| ·参环毛蚓不同部位RNA的差异分析 | 第33-34页 |
| ·半定量PCR的条件设计原则 | 第34页 |
| ·本研究半定量PCR策略的优劣 | 第34页 |
| 5 结论 | 第34-35页 |
| 第二章 参环毛蚓MT-2基因的克隆和原核表达 | 第35-61页 |
| 1 引言 | 第35页 |
| 2 材料 | 第35-39页 |
| ·菌株 | 第35-36页 |
| ·质粒和载体 | 第36-37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·普通试剂 | 第37页 |
| ·分子生物学试剂 | 第37页 |
| ·配制试剂 | 第37-39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·序列分析软件 | 第39页 |
| 3 方法 | 第39-47页 |
| ·克隆重组质粒pGEM-T easy-MT-2的构建策略 | 第39-42页 |
| ·表达重组质粒PET-32a(+)-MT-2的构建策略 | 第42-47页 |
| 4 结果 | 第47-58页 |
| ·克隆载体pGEMT easy-MT-2的构建 | 第47-49页 |
| ·MT-2基因在E.coli中的原核表达 | 第49-58页 |
| 5 讨论 | 第58-60页 |
| ·构建克隆质粒和表达质粒的策略 | 第58-59页 |
| ·参环毛蚓MT-2序列分析 | 第59页 |
| ·本研究工作中大肠杆菌转化菌诱导表达策略 | 第59-60页 |
| 6 结论 | 第60-61页 |
| 第三章 Tail-PCR法获得MT-2基因的启动子片段 | 第61-70页 |
| 1 引言 | 第61页 |
| 2 材料与方法 | 第61-65页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·方法 | 第62-65页 |
| 3 结果 | 第65-68页 |
| ·参环毛蚓总DNA提取效果 | 第65-66页 |
| ·Tail-PCR扩增产物电泳图谱分析 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| ·Tail-PCR操作优势 | 第68页 |
| ·Tail-PCR引物的设计原则 | 第68-69页 |
| ·本研究工作所存在的问题 | 第69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 第四章 全文总结 | 第70-72页 |
| 1 实验总结 | 第70页 |
| 2 创新之处 | 第70页 |
| 3 研究展望 | 第70-72页 |
| 论文参考文献 | 第72-76页 |
| 附录 | 第76-110页 |
| 附录1 试剂盒使用说明 | 第76-101页 |
| 附录2 原核表达载体RNA二级结构预测 | 第101-104页 |
| 附录3 已发表相关文献综述 | 第104-109页 |
| 附录4 英文缩略语 | 第109-110页 |
| 在校发表文章情况 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
