| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-24页 |
| 参考文献 | 第16-24页 |
| 第一章 黑色素瘤进展过程中免疫细胞表型功能及相关蛋白变化 | 第24-39页 |
| 绪言 | 第24页 |
| 1 实验材料 | 第24-26页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·细胞、动物 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-28页 |
| ·脾细胞和淋巴结细胞的制备 | 第26页 |
| ·肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的分离 | 第26页 |
| ·细胞表面分子流式分析 | 第26-27页 |
| ·细胞因子胞内染色 | 第27页 |
| ·磷酸化蛋白胞内染色 | 第27页 |
| ·酶联免疫法(ELISA)检测细胞因子表达 | 第27页 |
| ·Western blot | 第27-28页 |
| ·HE染色 | 第28页 |
| ·小鼠模型 | 第28页 |
| ·统计分析 | 第28页 |
| 3 实验结果 | 第28-34页 |
| ·黑色素瘤进展过程中免疫细胞表型变化 | 第28-31页 |
| ·黑色素瘤进展过程中T细胞表面抑制性受体表达变化 | 第31-32页 |
| ·黑色素瘤进展过程中T细胞功能变化 | 第32-33页 |
| ·黑色素瘤进展过程中CD4~+ T细胞pSHP-2表达变化 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 5 小结 | 第36页 |
| 6 参考文献 | 第36-39页 |
| 第二章 T细胞中SHP-2敲除对黑色素瘤增殖及转移的影响 | 第39-54页 |
| 绪言 | 第39页 |
| 1 实验材料 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·细胞、动物 | 第39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-44页 |
| ·SHP-2条件性敲除小鼠制备 | 第39-40页 |
| ·条件性敲除小鼠鉴定 | 第40-41页 |
| ·石蜡切片、冰冻切片制作 | 第41页 |
| ·HE染色&免疫组化 | 第41-42页 |
| ·Tunel法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法) | 第42页 |
| ·RNA提取及反转 | 第42-43页 |
| ·实时荧光定量PCR(RT-qPCR) | 第43页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第43-44页 |
| ·小动物活体成像 | 第44页 |
| ·小鼠黑色素瘤皮下移植模型和被动转移模型 | 第44页 |
| ·统计分析 | 第44页 |
| 3 实验结果 | 第44-51页 |
| ·CD4~+ T细胞中SHP-2敲除对黑色素瘤生长的影响 | 第44-46页 |
| ·CD4~+ T细胞中SHP-2敲除对黑色素瘤荷瘤小鼠存活率的影响 | 第46页 |
| ·CD4~+ T细胞中SHP-2敲除对肿瘤增殖凋亡的影响 | 第46-47页 |
| ·CD4~+ T细胞中SHP-2敲除对黑色素瘤转移的影响 | 第47-49页 |
| ·CD4~+ T细胞中SHP-2敲除对黑色素瘤转移相关蛋白表达的影响 | 第49-50页 |
| ·CD4~+ T细胞中SHP-2敲除对黑色素瘤转移相关基因mRNA表达的影响 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52页 |
| 6 参考文献 | 第52-54页 |
| 第三章 T细胞中SHP-2敲除对荷瘤小鼠免疫细胞亚群数量及功能影响 | 第54-71页 |
| 绪言 | 第54页 |
| 1 实验材料 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·细胞、动物 | 第54页 |
| ·仪器 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-56页 |
| ·TIL分离 | 第54页 |
| ·流式分选 | 第54页 |
| ·细胞表面分子流式分析 | 第54-55页 |
| ·细胞因子胞内染色 | 第55页 |
| ·RNA提取及反转 | 第55页 |
| ·实时荧光定量PCR(RT-qPCR) | 第55页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第55页 |
| ·流式细胞术微球阵列法(Cytometric Bead Array,CBA) | 第55-56页 |
| ·HE&免疫组化 | 第56页 |
| ·小鼠模型 | 第56页 |
| ·统计分析 | 第56页 |
| 3 实验结果 | 第56-67页 |
| ·CD4~+ T细胞中SHP-2敲除对细胞因子表达影响 | 第56-57页 |
| ·黑色素瘤组织中的IL-6主要由免疫细胞分泌 | 第57-58页 |
| ·SHP-2敲除激活黑色素瘤组织的STAT3信号 | 第58-59页 |
| ·T细胞中SHP-2敲除不影响CD4~+ T和CD8~+ T细胞的数量 | 第59-60页 |
| ·SHP-2敲除不改变肿瘤浸润免疫细胞中调节性细胞的比例 | 第60页 |
| ·SHP-2敲除促进肿瘤浸润CD4~+ T细胞表面PD-1表达 | 第60-61页 |
| ·SHP-2敲除促进CD4~+ T细胞表面PD-1表达 | 第61-62页 |
| ·SHP-2敲除不影响荷瘤小鼠脾脏T细胞IFN-γ分泌 | 第62-63页 |
| ·SHP-2敲除促进了MDSC在原发灶和脾脏部位的积累 | 第63-64页 |
| ·SHP-2敲除促进了MDSC在肺转移灶和脾脏部位的积累 | 第64-65页 |
| ·SHP-2敲除不影响肿瘤相关巨嘴细胞的数量 | 第65-66页 |
| ·SHP-2敲除促进了MDSC功能相关分子表达 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 5 小结 | 第68页 |
| 6 参考文献 | 第68-71页 |
| 第四章 IL-6和MDSC在黑色素瘤生长转移的作用 | 第71-77页 |
| 绪言 | 第71页 |
| 1 实验材料 | 第71页 |
| ·试剂 | 第71页 |
| ·细胞、动物 | 第71页 |
| ·仪器 | 第71页 |
| 2 实验方法 | 第71-72页 |
| ·流式细胞分选 | 第71页 |
| ·MDSC-B16BL6共移植 | 第71-72页 |
| ·细胞表面分子流式分析 | 第72页 |
| ·IL-6抗体中和实验 | 第72页 |
| ·统计分析 | 第72页 |
| 3 实验结果 | 第72-74页 |
| ·SH-2条件性敲除小鼠的MDSC促进黑色素瘤生长 | 第72-73页 |
| ·中和IL-6抑制SHP-2条件性敲除小鼠MDSC在脾脏的积累 | 第73-74页 |
| ·中和IL-6抑制SHP-2条件性敲除小鼠黑色素瘤生长 | 第74页 |
| 4 讨论 | 第74-75页 |
| 5 小结 | 第75页 |
| 6 参考文献 | 第75-77页 |
| 结语 | 第77-78页 |
| 附录一 缩略词表 | 第78-80页 |
| 附录二 在读期间发表论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
