| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 1、文献综述 | 第10-24页 |
| ·番木瓜抗环斑病毒(PRSV)的研究进展 | 第10-13页 |
| ·番木瓜环斑病毒(PRSV) | 第10-11页 |
| ·PRSV研究进展 | 第11-13页 |
| ·防治措施 | 第13-15页 |
| ·农业防治 | 第13-14页 |
| ·番木瓜新品种选育 | 第14-15页 |
| ·番木瓜转基因方法的探索 | 第15-17页 |
| ·基因枪转化法 | 第15页 |
| ·农杆菌介导法 | 第15-16页 |
| ·花粉管通道法(Pollen-tube pathway) | 第16-17页 |
| ·植物ihpRNA表达载体构建方法的研究进展 | 第17-22页 |
| ·酶切连接法构建ihpRNA | 第20页 |
| ·Gateway克隆法构建ihpRNA | 第20-21页 |
| ·重叠延伸PCR法构建ihpRNA | 第21-22页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 2、材料和方法 | 第24-42页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·菌种与质粒 | 第24页 |
| ·毒源及植物材料 | 第24页 |
| ·试剂耗材 | 第24页 |
| ·实验所需仪器设备 | 第24-25页 |
| ·实验用主要培养基与缓冲液 | 第25页 |
| ·PCR引物合成及测序 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-42页 |
| ·核酸提取 | 第25-27页 |
| ·基于PRSV-CP的ihpRNA植物表达载体的构建 | 第27-35页 |
| ·花粉管通道法遗传转化番木瓜 | 第35-36页 |
| ·转化ihpRNA种子苗的检测 | 第36-42页 |
| 3、 结果与分析 | 第42-66页 |
| ·番木瓜PRSV ihpRNA结构的构建 | 第42-49页 |
| ·番木瓜PRSV基因序列分析及引物设计 | 第42-44页 |
| ·MOOE-PCR法反应条件的优化 | 第44-47页 |
| ·MOOE-PCR法快速构建ihpRNA结构 | 第47-49页 |
| ·番木瓜PRSV嵌合型植物ihpRNA结构的构建 | 第49-50页 |
| ·番木瓜PRSV ihpRNA植物表达载体的构建 | 第50-52页 |
| ·pCambia-hpRNA转化番木瓜 | 第52-66页 |
| ·花粉管通道转化番木瓜 | 第52-55页 |
| ·转化ihpRNA番木瓜种子苗抗性筛选 | 第55页 |
| ·转化ihpRNA番木瓜种苗PCR鉴定 | 第55-57页 |
| ·转基因番木瓜RT-PCR鉴定 | 第57-58页 |
| ·转基因株系攻毒实验和ELISA检测 | 第58-62页 |
| ·转基因番木瓜植株Northern blot分析 | 第62-66页 |
| 4、讨论 | 第66-70页 |
| ·ihpRNA载体构建策略及其意义 | 第66-67页 |
| ·花粉管通道法在番木瓜遗传转化中的应用 | 第67-68页 |
| ·转基因株系的筛选方法 | 第68页 |
| ·转基因番木瓜植株抗病稳定性及抗病品系的培育 | 第68-70页 |
| 5、结论与创新点 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 英文缩写说明 | 第79-80页 |
| 试剂配制 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |