中文摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-8页 |
目录 | 第8-11页 |
一、前言 | 第11-14页 |
二、材料与方法 | 第14-38页 |
(一)材料 | 第14-17页 |
1、细胞系 | 第14页 |
2、基因芯片和组织芯片 | 第14页 |
3、主要仪器 | 第14-16页 |
4、主要抗体 | 第16页 |
5、主要试剂 | 第16-17页 |
(二)方法 | 第17-38页 |
1、主要试剂的配制 | 第17-19页 |
2、CT45A1 重组蛋白的制备 | 第19-20页 |
3、CT45A1 鼠源性单克隆抗体的制备 | 第20-21页 |
4、CT45A1 兔源性多克隆抗体的制备 | 第21页 |
5、细胞培养 | 第21页 |
6、感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
7、可溶性抗原的免疫酶联吸附试验 | 第22页 |
8、磷酸钙沉淀法制备慢病毒 | 第22-23页 |
9、细胞转染 | 第23页 |
10、CT45A1 shRNA 基因沉默 | 第23页 |
11、体外细胞增殖实验 | 第23-24页 |
12、CT45A1 对 MCF7 细胞周期的作用 | 第24页 |
13、CT45A1 对 MCF7 细胞凋亡的作用(流式细胞术) | 第24-25页 |
14、CT45A1 对 MCF7 细胞凋亡的作用(TUNEL) | 第25-26页 |
15、Mammosphere formation assay | 第26页 |
16、软琼脂法集落形成实验 | 第26页 |
17、瑞姬氏染色 | 第26-27页 |
18、CT45A1 对 MCF7 细胞体外粘附的作用 | 第27页 |
19、CT45A1 对 MCF7 细胞迁移的作用 | 第27-28页 |
20、CT45A1 对 MCF7 细胞体外侵袭的作用 | 第28页 |
21、乳腺癌原位移植瘤模型 | 第28-29页 |
22、组织切片 H&E 染色 | 第29页 |
23、细胞和组织免疫荧光 | 第29-30页 |
24、DNA microarray | 第30-31页 |
25、CT45A1 对 MCF7 细胞基因表达的作用 | 第31-36页 |
26、CT45A1 对 MCF7 相关蛋白表达的作用 | 第36-37页 |
27、统计学分析 | 第37-38页 |
三、结果 | 第38-80页 |
(一)肿瘤干/祖细胞相关基因的筛选 | 第38-41页 |
(二)CT45A1 在多种肿瘤中异常高表达及其意义 | 第41-46页 |
1、CT45A1 在正常人组织和肿瘤细胞株中的表达 | 第41-43页 |
2、CT45A1 蛋白在乳腺癌组织中的表达 | 第43-46页 |
(三)CT45A1 的功能探讨:促进肿瘤生长和转移 | 第46-60页 |
1、CT45A1 过表达细胞模型的建立 | 第46-48页 |
2、CT45A1 shRNA 基因沉默胃癌细胞模型的建立 | 第48-50页 |
3、鉴定 CT45A1 对细胞形态学的影响 | 第50-52页 |
4、鉴定 CT45A1 的细胞学功能 | 第52-55页 |
5、CT45A1 在小鼠体内的致瘤性 | 第55-60页 |
(四)CT45A1 作用机制的研究 | 第60-80页 |
1、CT45A1 的细胞学机制 | 第60-69页 |
2、CT45A1 的分子机制 | 第69-78页 |
3、CT45A1 可使 ERK、CREB 和 AKT 信号通路磷酸化 | 第78-80页 |
四、讨论 | 第80-86页 |
1、CT45A1 作为新的原癌基因 | 第80页 |
2、CT45A1 与 EMT | 第80-82页 |
3、CT45A1 与干性 | 第82页 |
4、CT45A1 与肿瘤发生 | 第82-83页 |
5、CT45A1 与肿瘤转移 | 第83-84页 |
6、CT45A1 与肿瘤诊断和治疗 | 第84页 |
7、本研究的意义与展望 | 第84-86页 |
五、结论 | 第86-88页 |
六、参考文献 | 第88-93页 |
综述 | 第93-143页 |
References | 第109-143页 |
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文 | 第143-145页 |
攻读学位期间获奖情况 | 第145-146页 |
中英文缩写词表 | 第146-147页 |
致谢 | 第147-149页 |