| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-32页 |
| ·引言 | 第13-14页 |
| ·腈类化合物和腈转化酶 | 第14页 |
| ·腈水解酶的来源和分类 | 第14-19页 |
| ·腈水解酶的来源 | 第14-15页 |
| ·腈水解酶超家族 | 第15页 |
| ·腈水解酶的分类 | 第15-17页 |
| ·芳香族腈水解酶 | 第15-16页 |
| ·脂肪族腈水解酶 | 第16页 |
| ·芳香乙腈类腈水解酶 | 第16-17页 |
| ·溴苯腈类腈水解酶 | 第17页 |
| ·腈水解酶的结构与催化机制 | 第17-19页 |
| ·腈水解酶的工业应用 | 第19-23页 |
| ·尼克酸的合成 | 第19-20页 |
| ·丙烯酸的合成 | 第20页 |
| ·羟基乙酸的合成 | 第20-21页 |
| ·(R)-扁桃酸的合成 | 第21页 |
| ·其他医药中间体 | 第21-22页 |
| ·腈水解酶在生物降解与生物修复中的应用 | 第22-23页 |
| ·腈水合酶和酰胺酶 | 第23-26页 |
| ·腈水合酶的来源 | 第23-24页 |
| ·酰胺酶的来源 | 第24-25页 |
| ·腈水合酶和酰胺酶的应用 | 第25-26页 |
| ·非天然氨基酸的化学酶法合成 | 第26-30页 |
| ·非天然氨基酸 | 第26页 |
| ·非天然氨基酸的制备方法 | 第26-30页 |
| ·本课题的意义和研究内容 | 第30-32页 |
| 第2章 高立体选择性腈水解酶基因的筛选、克隆表达及性质鉴定 | 第32-49页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-37页 |
| ·主要实验试剂 | 第32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32-33页 |
| ·质粒、宿主菌和引物 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·分析方法 | 第34-35页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第34页 |
| ·腈水解酶酶活测定 | 第34-35页 |
| ·高效液相色谱检测方法 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第35页 |
| ·腈水解酶基因的克隆 | 第35-36页 |
| ·重组腈水解酶质粒的构建 | 第36页 |
| ·腈水解酶氨基酸序列分析 | 第36页 |
| ·重组菌的构建及目的蛋白的诱导表达 | 第36页 |
| ·重组腈水解酶的分离纯化 | 第36页 |
| ·重组腈水解酶最适反应温度、pH及其稳定性 | 第36页 |
| ·金属离子对重组腈水解酶酶活的影响 | 第36-37页 |
| ·重组腈水解酶的底物谱 | 第37页 |
| ·重组腈水解酶水解苯甘氨腈的动力学研究 | 第37页 |
| ·重组菌E.coli BL21/SWRW1介导的苯甘氨腈的动力学拆分 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-48页 |
| ·腈水解酶的筛选 | 第37-38页 |
| ·重组腈水解酶SWRW1的序列分析 | 第38-41页 |
| ·重组腈水解酶SWRW1的表达及纯化 | 第41-42页 |
| ·重组腈水解酶SWRW1最适反应pH、温度及其稳定性 | 第42-43页 |
| ·金属离子和EDTA对重组腈水解酶SWRW1酶活力的影响 | 第43-44页 |
| ·重组腈水解酶SWRW1的底物谱 | 第44-45页 |
| ·重组菌E.coli BL21/SWRW1介导的苯甘氨腈的动力学拆分 | 第45-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 第3章 水相及两相体系中重组菌E.coli BL21/SWRW1催化制备D-苯甘氨酸研究 | 第49-64页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-51页 |
| ·主要实验试剂 | 第49页 |
| ·主要实验仪器 | 第49-50页 |
| ·菌株及培养基 | 第50页 |
| ·分析方法 | 第50页 |
| ·重组菌E.coli BL21/SWRW1腈水解酶活力测定 | 第50页 |
| ·高效液相色谱检测方法 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-51页 |
| ·重组菌E.coli BL21/SWRW1腈水解酶pH值稳定性 | 第50页 |
| ·水相中重组菌E.coli BL21/SWRW1介导的苯甘氨腈动态动力学拆分 | 第50页 |
| ·重组菌E.coli BL21/SWRW1在有机溶剂中耐受性的考察 | 第50-51页 |
| ·水-正辛醇两相体系中重组菌E.coli BL21/SWRW1介导的苯甘氨腈动态动力 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-63页 |
| ·水相中重组菌E.coli BL21/SWRW1介导的苯甘氨腈动态动力学拆分 | 第51-55页 |
| ·重组菌E.coli BL21/SWRW1在有机溶剂中耐受性的考察 | 第55-56页 |
| ·水-正辛醇体系重组菌E.coli BL21/SWRW1介导的苯甘氨腈动态动力学拆分 | 第56-58页 |
| ·两相体系中水含量对反应收率的影响 | 第56-58页 |
| ·其他苯甘氨腈消旋方法 | 第58-62页 |
| ·有机碱对底物的消旋作用 | 第59页 |
| ·水杨醛及其衍生物对底物的消旋作用 | 第59-62页 |
| ·微水相体系中重组菌E.coli BL21/SWRW1介导的苯甘氨腈动态动力学拆分 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第4章 腈水解酶交联酶聚集体介导的N-酰基苯甘氨腈及其衍生物的动态动力学拆分 | 第64-79页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·主要实验试剂 | 第64-65页 |
| ·主要实验仪器 | 第65页 |
| ·菌株及培养基 | 第65页 |
| ·分析方法 | 第65-66页 |
| ·腈水解酶酶活的检测 | 第65页 |
| ·高效液相色谱检测方法 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-67页 |
| ·腈水解酶粗酶的制备 | 第66页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的制备 | 第66页 |
| ·腈水解酶的沉淀 | 第66页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的制备 | 第66页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的性质研究 | 第66-67页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的酶活回收率 | 第66-67页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的稳定性 | 第67页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的形态 | 第67页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体介导的N-甲酰-苯甘氨腈的动态动力学拆分 | 第67页 |
| ·N-甲酰-苯甘氨腈的消旋研究 | 第67页 |
| ·动态动力学拆分反应条件的优化 | 第67页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的反应批次 | 第67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-78页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的制备 | 第67-70页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的性质鉴定 | 第70-71页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的形态 | 第70-71页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的稳定性 | 第71页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体介导的N-甲酰-苯甘氨腈的动态动力学拆分 | 第71-78页 |
| ·不同N-酰基保护基团对腈水解酶活性的影响 | 第71-73页 |
| ·不同碱性环境对N-甲酰基-苯甘氨腈消旋的影响 | 第73-74页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体介导的N-甲酰-苯甘氨腈的动态动力学拆分 | 第74-77页 |
| ·腈水解酶交联酶聚集体的反应批次 | 第77-78页 |
| ·本章小结 | 第78-79页 |
| 第5章 腈水解酶SWRW1光学选择性反转 | 第79-96页 |
| ·引言 | 第79-81页 |
| ·材料 | 第81-82页 |
| ·主要实验试剂 | 第81-82页 |
| ·主要实验仪器 | 第82页 |
| ·质粒、宿主菌和引物 | 第82页 |
| ·菌株及培养基 | 第82页 |
| ·分析方法 | 第82-83页 |
| ·突变体腈水解酶活力及ee值检测 | 第82-83页 |
| ·高效液相色谱检测方法 | 第83页 |
| ·实验方法 | 第83-84页 |
| ·腈水解酶氨基酸序列比对及分析 | 第83页 |
| ·腈水解酶蛋白模拟 | 第83-84页 |
| ·腈水解酶突变体库的构建 | 第84页 |
| ·结果与讨论 | 第84-95页 |
| ·腈水解酶氨基酸序列比对与分析 | 第84-86页 |
| ·腈水解酶SWRW1的蛋白结构模拟及光学选择性的反转 | 第86-87页 |
| ·(S)-腈水解酶光学选择性的提高 | 第87-91页 |
| ·突变体与底物对接及能量分析 | 第91-95页 |
| ·本章小结 | 第95-96页 |
| 第6章 结论与展望 | 第96-100页 |
| ·结论 | 第96-97页 |
| ·展望 | 第97-100页 |
| 参考文献 | 第100-114页 |
| 博士期间论文发表情况 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 附录 | 第116-122页 |
