犬瘟热病毒的分离、鉴定及单克隆抗体的研制
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 综述 | 第10-21页 |
| 1 病原特征 | 第10-15页 |
| ·CDV的理化特性 | 第10页 |
| ·CDV的分子生物学特点 | 第10-15页 |
| ·核蛋白基因和核蛋白(N) | 第11-12页 |
| ·磷蛋白基因和磷蛋白(P) | 第12页 |
| ·融合蛋白基因和融合蛋白(F) | 第12-13页 |
| ·基质蛋白基因和基质蛋白(M) | 第13页 |
| ·血凝蛋白基因和血凝素蛋白(H) | 第13-15页 |
| ·大蛋白基因和大蛋白(L) | 第15页 |
| 2 流行病学 | 第15-16页 |
| 3 临床症状 | 第16页 |
| 4 犬瘟热病毒病的致病机理 | 第16-17页 |
| 5 CDV的实验室诊断 | 第17-20页 |
| ·病毒的分离培养 | 第17-18页 |
| ·电镜检查 | 第18页 |
| ·包涵体检测 | 第18页 |
| ·免疫荧光抗体(FA)染色法 | 第18-19页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第19页 |
| ·RT-PCR检测 | 第19-20页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第一章 犬瘟热病毒的分离与鉴定 | 第21-33页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| ·病毒来源 | 第21页 |
| ·细胞 | 第21页 |
| ·主要溶液配制 | 第21-22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第22-23页 |
| 2 试验方法 | 第23-27页 |
| ·样品的处理及病毒分离培养 | 第23页 |
| ·病变样品的RT-PCR检测 | 第23-25页 |
| ·引物的设计和合成 | 第23页 |
| ·RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·反转录 | 第24页 |
| ·PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| ·细小病毒的PCR检查 | 第25-26页 |
| ·引物的设计和合成 | 第25页 |
| ·病变细胞DNA的提取 | 第25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| ·血凝试验 | 第26页 |
| ·红细胞悬液的制备 | 第26页 |
| ·血凝实验 | 第26页 |
| ·组织培养半数感染量(TCID_(50))测定 | 第26页 |
| ·病毒理化试验 | 第26-27页 |
| ·病毒囊膜试验 | 第26-27页 |
| ·病毒核酸型试验 | 第27页 |
| ·病毒酸碱敏感试验 | 第27页 |
| ·病毒温度敏感性试验 | 第27页 |
| 3 实验结果 | 第27-31页 |
| ·分离病毒感染VERO细胞产生的细胞病变 | 第27-28页 |
| ·CDV的RT-PCR检测 | 第28页 |
| ·细小病毒的PCR检测 | 第28-29页 |
| ·血凝试验 | 第29页 |
| ·病毒TCID_(50) | 第29-30页 |
| ·病毒的理化试验 | 第30-31页 |
| ·病毒囊膜试验 | 第30页 |
| ·病毒核酸型试验 | 第30-31页 |
| ·病毒酸碱敏感试验 | 第31页 |
| ·温度敏感性试验 | 第31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 第二章 抗犬瘟热病毒单克隆抗体的制备 | 第33-45页 |
| 1 材料 | 第33-35页 |
| ·细胞系和病毒株 | 第33页 |
| ·常用溶液配制 | 第33-34页 |
| ·动物 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第34-35页 |
| 2 方法 | 第35-40页 |
| ·抗原的制备 | 第35页 |
| ·动物免疫 | 第35页 |
| ·融合 | 第35-36页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第35页 |
| ·脾淋巴细胞的准备 | 第35-36页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第36页 |
| ·细胞融合 | 第36页 |
| ·最佳抗原包被浓度和抗体稀释度的确定 | 第36-37页 |
| ·检测板的准备 | 第37页 |
| ·杂交瘤细胞的检测及筛选 | 第37页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第37-38页 |
| ·腹水的制备 | 第38页 |
| ·单抗特性的鉴定 | 第38-39页 |
| ·单抗效价测定 | 第38页 |
| ·单抗特异性鉴定 | 第38页 |
| ·亚类鉴定 | 第38-39页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性鉴定 | 第39页 |
| ·单抗的反应性 | 第39-40页 |
| ·间接ELISA试验 | 第39页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第39页 |
| ·微量细胞培养中和试验 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-43页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第40页 |
| ·单抗腹水效价测定 | 第40页 |
| ·单抗特异性鉴定 | 第40页 |
| ·亚类鉴定 | 第40-41页 |
| ·杂交瘤分泌抗体的稳定性 | 第41页 |
| ·单抗的反应性 | 第41-42页 |
| ·间接ELISA试验 | 第41页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第41-42页 |
| ·微量细胞培养中和试验 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
