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抗生素、益生菌及银耳孢子发酵物对猪肠道硬壁门菌和拟杆门菌、脂肪沉积和脂肪代谢相关基因表达的影响及其作用机理

摘要第1-8页
Abstract第8-18页
前言第18-20页
第一部分 文献综述第20-37页
 1 肠道微生物第20-25页
   ·肠道微生物与脂肪沉积的关系第20-22页
   ·肠粘膜菌群第22-25页
 2 肠道菌群影响脂肪沉积的可能途径第25-29页
   ·SCFAs(short chain fatty acids)第25-26页
   ·肠道细菌引起的炎症第26-29页
 3 日粮对拟杆菌、硬壁菌的影响第29-37页
   ·碳水化合物、脂肪、蛋白质水平第30页
   ·硫酸粘杆菌素第30-31页
     ·粘杆菌素对微生物的影响第30-31页
     ·粘杆菌素对生产性能、脂肪代谢的影响第31页
   ·银耳孢子发酵物第31-33页
     ·银耳孢子发酵物的制备和组成第31-32页
     ·银耳多糖/银耳孢子发酵物对动物肠道微生物的影响第32页
     ·银耳多糖/银耳孢子发酵物对动物脂肪代谢的影响第32-33页
   ·益生菌第33-37页
     ·益生菌对脂肪沉积的影响第33-35页
     ·益生菌对肠道菌群的影响第35-37页
第二部分 目前存在的问题及本研究的目的、意义和内容第37-39页
 1 存在问题第37页
 2 本研究的目的和意义第37页
 3 研究内容第37页
 4 研究路线第37-39页
第三部分 试验研究第39-96页
 试验一 猪回肠粘膜和食糜菌群与脂肪沉积的关系第39-55页
  1 前言第39页
  2 材料与方法第39-44页
   ·试验动物及日粮第39页
   ·饲养管理第39-41页
   ·样品采集第41页
     ·食糜第41页
     ·回肠粘膜第41页
     ·肌肉第41页
   ·测定指标及方法第41页
   ·拟杆菌、硬壁菌测定第41-44页
     ·细菌菌株第41页
     ·细菌菌株的培养及DNA提取第41-42页
     ·引物第42页
     ·标准品的制备及鉴定第42-44页
       ·目的片段的扩增第42-43页
       ·PCR产物的回收第43页
       ·PCR产物的T载体连接第43页
       ·转化第43页
       ·筛选重组子第43页
       ·质粒的提取第43页
       ·质粒DNA的测序第43-44页
     ·实时荧光定量PCR标准曲线的建立第44页
     ·硬壁菌门、拟杆菌门和总细菌的检测第44页
       ·细菌DNA提取第44页
       ·实时荧光定量PCR反应第44页
   ·数据处理与统计分析第44页
  3 结果第44-52页
   ·生产性能第45页
   ·胴体指标第45页
   ·细菌DNA的提取第45页
   ·DM猪和DLY猪肠粘膜拟杆菌和硬壁菌拷贝数第45-52页
     ·标准质粒的构建与鉴定第45-46页
     ·标准曲线第46-48页
     ·硬壁门菌、拟杆菌和总细菌扩增曲线和溶解曲线第48-49页
     ·DM猪和DLY猪回肠粘膜和内容物各类细菌拷贝数和比值第49-51页
     ·肠道菌群和背膘厚相关性分析第51-52页
  4 讨论第52-54页
   ·生产性能和胴体指标第52页
   ·肠道菌群第52-53页
   ·肠道菌群与脂肪沉积的关系第53-54页
  5 小结第54-55页
 试验二 猪回肠粘膜微生物与血浆LPS水平、TLR4、TLR5基因的关系第55-63页
  1 前言第55页
  2 材料方法第55-58页
   ·试验材料第55页
   ·肠道拟杆菌、硬壁菌数量检测第55页
   ·TLR4、TLR5 mRNA相对表达量检测第55-58页
     ·总RNA的提取第55-56页
     ·检测RNA的完整性第56页
     ·各组织总RNA浓度的测定第56页
     ·反转录第56-57页
     ·引物设计与合成第57页
     ·定量检测基因的表达第57-58页
   ·数据处理和统计分析第58页
  3 结果第58-61页
   ·DM和DLY猪回肠粘膜和皮下脂肪TLR4、TLR5相对表达量差异第58-60页
     ·RNA质量检测第58-59页
     ·RT-PCR检测目标基因和内参基因第59页
     ·DM和DLY猪回肠粘膜和皮下脂肪TLR4、TLR5相对表达量差异第59-60页
   ·回肠粘膜和皮下脂肪TLR4相对表达量与硬壁菌/拟杆菌比值的相关关系第60-61页
   ·血浆LPS水平与肠道硬壁菌/拟杆菌比值的相关关系第61页
  4 讨论第61-62页
  5 小结第62-63页
 试验三 微生态调节剂对猪生产性能、胴体品质和回肠粘膜菌群的影响第63-74页
  1 前言第63页
  2 材料与方法第63-64页
   ·试验设计第63页
   ·试验日粮第63-64页
   ·饲养管理第64页
   ·样品采集第64页
   ·测定指标及方法第64页
     ·生产性能指标第64页
     ·胴体指标第64页
     ·肌内脂肪含量测定第64页
     ·回肠粘膜和食糜中拟杆菌、硬壁菌和总细菌数量检测第64页
   ·数据处理和统计分析第64页
  3 结果第64-69页
   ·生产性能第64-65页
   ·胴体指标和肌内脂肪第65-66页
   ·微生态调节剂对回肠粘膜菌群数最及比例的影响第66-69页
     ·细菌实时荧光定最PCR扩增曲线和溶解曲线第66-67页
     ·微生态调节剂对回肠粘膜硬壁菌和拟杆菌数量和比例的影响第67-68页
     ·肠道菌群和背膘厚度相关性分析第68-69页
  4 讨论第69-73页
   ·微生态调节剂对DLY猪生产性能的影响第69-70页
   ·微生态调节剂对DM猪和DLY猪脂肪沉积的影响第70-71页
   ·微生态调节剂对回肠粘膜菌群数量及比例的影响第71-72页
   ·肠道微生态调节剂作用下脂肪沉积与肠道粘膜菌群的关系第72-73页
  5 小结第73-74页
 试验四 微生态调节剂对猪血清指标、炎症因子和脂肪代谢相关基因表达量的影响第74-96页
  1 前言第74页
  2 材料与方法第74-77页
   ·试验设计第74页
   ·试验日粮第74页
   ·饲养管理第74页
   ·样品采集第74-75页
     ·血清、血浆第74-75页
     ·肌肉、脂肪、肝脏第75页
     ·回肠粘膜第75页
   ·测定指标第75-77页
     ·血液指标第75页
       ·血浆脂多糖第75页
       ·血液脂质代谢指标第75页
       ·血清激素第75页
     ·脂肪、肝脏和回肠粘膜mRNA相对表达量测定第75-77页
       ·总RNA提取第75-76页
       ·检测RNA完整性第76页
       ·RNA反转录第76页
       ·引物设计与合成第76-77页
       ·RT-PCR检测基因表达量第77页
  3 数据处理与统计分析第77页
  4 结果第77-88页
   ·血浆脂多糖第77-78页
   ·血清葡萄糖和激素第78-79页
   ·血液脂质代谢指标第79-80页
   ·微生态调节剂对基因表达量的影响第80-88页
     ·总RNA质量鉴定第80页
     ·RT-PCR检测目标基因和内参基因第80-81页
     ·基因PCR扩增曲线和溶解曲线第81-85页
     ·炎性细胞因子和TLR4基因相对表达量第85-86页
     ·脂肪代谢相关基因相对表达量第86-88页
       ·肝脏第86-87页
       ·皮下脂肪第87-88页
  5 讨论第88-95页
   ·微生态调节剂对血浆脂多糖水平的影响第88-89页
   ·微生态调节剂对血清葡萄糖和激素的影响第89-90页
   ·微生态调节剂对血液脂质代谢指标的影响第90-92页
   ·微生态调节剂对基因表达量的影响第92-95页
     ·炎性细胞因子和TLR4基因相对表达量第92-94页
     ·脂肪代谢相关基因相对表达量第94-95页
  6 小结第95-96页
第四部分 本研究的总体讨论与结论第96-104页
 1 总体讨论第96-101页
   ·回肠食糜和粘膜硬壁菌和拟杆菌数量及比例第96-98页
   ·肠粘膜菌群与脂肪沉积相关性第98-99页
   ·肠粘膜和脂肪组织中TLR4基因和血浆LPS水平与肠道菌群的关系第99-100页
   ·微生态调节剂对回肠菌群、脂肪沉积、代谢的影响第100-101页
 2 结论第101-102页
 3 创新点第102-103页
 4 有待进一步研究的问题第103-104页
参考文献第104-120页
致谢第120-121页
读博士期间发表的论文第121页

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