| 中文摘要 | 第13-15页 |
| 英文摘要 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-36页 |
| 1.1 弓形虫及弓形虫病基本概述 | 第17-27页 |
| 1.1.1 发现过程 | 第17页 |
| 1.1.2 流行情况及特点 | 第17-19页 |
| 1.1.3 分类及发育形态 | 第19-20页 |
| 1.1.4 生活史 | 第20-22页 |
| 1.1.5 临床表现及危害 | 第22页 |
| 1.1.6 致病机制 | 第22-23页 |
| 1.1.7 入侵与增殖过程及重要蛋白质 | 第23-27页 |
| 1.1.8 治疗方法 | 第27页 |
| 1.2 硫氧还蛋白 | 第27-30页 |
| 1.2.1 硫氧还蛋白的功能 | 第27-28页 |
| 1.2.2 硫氧还蛋白的作用机制 | 第28-29页 |
| 1.2.3 寄生虫硫氧还蛋白的研究进展 | 第29-30页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第30-35页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9技术原理 | 第30-32页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9基因编辑 | 第32-33页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9技术应用 | 第33-35页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第35-36页 |
| 第二章 弓形虫Trx生物信息学分析与基因克隆 | 第36-45页 |
| 2.1 引言 | 第36页 |
| 2.2 材料与方法 | 第36-39页 |
| 2.2.1 材料 | 第36-37页 |
| 2.2.2 方法 | 第37-39页 |
| 2.3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 2.3.1 弓形虫Trx基本性质 | 第39页 |
| 2.3.2 弓形虫Trx理化性质 | 第39页 |
| 2.3.3 弓形虫Trx二级结构、免疫原性及亲疏水性 | 第39-40页 |
| 2.3.4 弓形虫Trx信号肽及跨膜区 | 第40页 |
| 2.3.5 弓形虫Trx结构域分析 | 第40-41页 |
| 2.3.6 弓形虫Trx同源性及进化树分析 | 第41-43页 |
| 2.3.7 目的片段扩增结果 | 第43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-44页 |
| 2.4.1 弓形虫Trx结构特点 | 第43-44页 |
| 2.4.2 虫体纯化方式的选择 | 第44页 |
| 2.5 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 弓形虫Trx表达、定位及抗体特异性检测 | 第45-63页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 材料与方法 | 第45-54页 |
| 3.2.1 材料 | 第45-48页 |
| 3.2.2 方法 | 第48-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-60页 |
| 3.3.1 重组表达质粒双酶切鉴定结果 | 第54页 |
| 3.3.2 重组蛋白质表达与纯化结果 | 第54-56页 |
| 3.3.3 免疫小鼠血清抗体效价检测结果 | 第56页 |
| 3.3.4 抗体特异性检测结果 | 第56-57页 |
| 3.3.5 弓形虫Trx天然表达鉴定结果 | 第57页 |
| 3.3.6 弓形虫Trx分泌特性鉴定结果 | 第57-58页 |
| 3.3.7 弓形虫Trx亚细胞定位结果 | 第58-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-62页 |
| 3.4.1 酶切位点选择原则 | 第60页 |
| 3.4.2 蛋白质诱导表达条件确定 | 第60-61页 |
| 3.4.3 多克隆抗体制备条件确定 | 第61页 |
| 3.4.4 亚细胞定位分析 | 第61-62页 |
| 3.5 小结 | 第62-63页 |
| 第四章 弓形虫Trx黏附能力、抗氧化能力、转录及表达水平分析 | 第63-87页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 材料与方法 | 第63-70页 |
| 4.2.1 材料 | 第63-64页 |
| 4.2.2 方法 | 第64-70页 |
| 4.3 结果与分析 | 第70-83页 |
| 4.3.1 氧化还原活性分析结果 | 第70-71页 |
| 4.3.2 肝素结合实验结果 | 第71-72页 |
| 4.3.3 细胞黏附实验结果 | 第72-75页 |
| 4.3.4 抗氧化实验结果 | 第75-78页 |
| 4.3.5 转录水平分析结果 | 第78-81页 |
| 4.3.6 表达水平分析结果 | 第81-82页 |
| 4.3.7 抗H_2O_2氧化能力结果 | 第82-83页 |
| 4.4 讨论 | 第83-86页 |
| 4.4.1 弓形虫Trx氧化还原活性分析 | 第83页 |
| 4.4.2 弓形虫Trx肝素结合能力分析 | 第83-84页 |
| 4.4.3 弓形虫Trx细胞黏附能力分析 | 第84页 |
| 4.4.4 弓形虫Trx抗氧化能力分析 | 第84-86页 |
| 4.4.5 弓形虫Trx转录及表达水平分析 | 第86页 |
| 4.5 小结 | 第86-87页 |
| 第五章 弓形虫Trx过表达虫株的构建及其表型研究 | 第87-109页 |
| 5.1 引言 | 第87页 |
| 5.2 材料与方法 | 第87-99页 |
| 5.2.1 材料 | 第87-88页 |
| 5.2.2 方法 | 第88-99页 |
| 5.3 结果与分析 | 第99-104页 |
| 5.3.1 弓形虫Trx过表达虫株单克隆鉴定结果 | 第99-100页 |
| 5.3.2 弓形虫Trx过表达虫株入侵速率比较结果 | 第100-101页 |
| 5.3.3 弓形虫Trx过表达虫株增殖速率比较结果 | 第101页 |
| 5.3.4 弓形虫Trx过表达虫株转录水平比较结果 | 第101页 |
| 5.3.5 弓形虫Trx过表达虫株表达水平比较结果 | 第101-102页 |
| 5.3.6 弓形虫Trx过表达虫株氧化还原指标比较结果 | 第102-104页 |
| 5.4 讨论 | 第104-108页 |
| 5.4.1 Trx过表达虫株构建思路 | 第104页 |
| 5.4.2 Trx过表达质粒p UPRT-T7S4-Trx的构建 | 第104-106页 |
| 5.4.3 Trx过表达虫株的构建、筛选及鉴定 | 第106-107页 |
| 5.4.4 Trx过表达虫株入侵速率、增殖速率、转录水平及表达水平分析 | 第107页 |
| 5.4.5 Trx过表达虫株氧化还原指标分析 | 第107-108页 |
| 5.5 小结 | 第108-109页 |
| 第六章 结论、创新点及展望 | 第109-111页 |
| 6.1 结论 | 第109页 |
| 6.2 创新点 | 第109页 |
| 6.3 展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 | 第124-125页 |
