| 英文缩略词 | 第1-10页 |
| 第一部分 DENND2D抑制非小细胞肺癌增殖能力和致瘤性 | 第10-78页 |
| 第一章 导论 | 第10-12页 |
| 第二章 摘要 | 第12-15页 |
| 第三章 材料和方法 | 第15-52页 |
| 1. 实验材料 | 第15-45页 |
| ·细胞系 | 第15页 |
| ·肺癌患者组织标本及其相关信息 | 第15-39页 |
| ·菌株、质粒载体及病毒载体 | 第39-40页 |
| ·抗体 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40-42页 |
| ·主要试剂盒 | 第40-41页 |
| ·其他主要试剂 | 第41-42页 |
| ·免疫细胞化学分析/免疫组织化学分析主要试剂 | 第42页 |
| ·分子生物学试剂 | 第42页 |
| ·常用试剂配制方法 | 第42-43页 |
| ·LB(Luria-Bertani)培养基(1L) | 第42页 |
| ·10×PBS缓冲液 | 第42页 |
| ·1×PBST缓冲液 | 第42-43页 |
| ·5×TBE电泳缓冲液 | 第43页 |
| ·5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 | 第43页 |
| ·Westem blot1×蛋白电泳转移缓冲液 | 第43页 |
| ·半干转Western blot 10×蛋白转移缓冲液 | 第43页 |
| ·0.2%结晶紫溶液 | 第43页 |
| ·透化剂 | 第43页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第43-45页 |
| ·主要分析软件 | 第45页 |
| 2. 实验方法 | 第45-51页 |
| ·分子生物学方法 | 第45-47页 |
| ·细胞生物学方法 | 第47-51页 |
| ·细胞复苏 | 第47-48页 |
| ·细胞冻存 | 第48页 |
| ·细胞传代 | 第48页 |
| ·稳定过表达DENND2D的A549细胞株的筛选 | 第48页 |
| ·重组腺病毒介导的细胞感染 | 第48-49页 |
| ·CCK-8细胞增殖实验 | 第49页 |
| ·平板集落形成实验 | 第49页 |
| ·DENND2D鼠单克隆抗体制备 | 第49-50页 |
| ·免疫组织化学染色(以中杉金桥公司超敏即用型二步法(非生物素)检测试剂盒PV-9003为例) | 第50页 |
| ·裸鼠体内成瘤实验 | 第50-51页 |
| ·Annexin-V FITC法染色流式细胞术进行凋亡检测 | 第51页 |
| ·顺铂作用于细胞的杀伤率检测 | 第51页 |
| 3. 统计学分析 | 第51-52页 |
| 第四章 实验结果 | 第52-72页 |
| 1. DENND2D的表达情况 | 第52-63页 |
| ·非小细胞肺癌细胞系中DENND2D的DNA拷贝数、mRNA和蛋白质的表达水平 | 第52-53页 |
| ·DENND2D在非小细胞肺癌肿瘤发生过程中表达水平 | 第53-63页 |
| ·mRNA表达水平检测 | 第53页 |
| ·蛋白质表达水平检测 | 第53-63页 |
| 2. DENND2D对非小细胞肺癌细胞的表型影响 | 第63-64页 |
| ·DENND2D对非小细胞肺癌细胞增殖的影响 | 第63页 |
| ·DENND2D对非小细胞肺癌细胞致瘤性的影响 | 第63-64页 |
| 3. DENND2D功能研究 | 第64-72页 |
| ·外源过表达DENND2D诱导非小细胞肺癌细胞发生凋亡 | 第64页 |
| ·Western blot检测凋亡marker cleaved PARP | 第64页 |
| ·流式细胞术检测凋亡发生率与DENND2D表达量关系 | 第64页 |
| ·DENND2D通过对PARP1的调控影响顺铂对肺癌细胞系H1299的细胞毒性 | 第64-72页 |
| ·外源过表达DENND2D的H1299细胞顺铂处理后细胞存活IC #50值降低 | 第64-71页 |
| ·DENND2D与PARP1转录水平表达呈负相关 | 第71页 |
| ·DENND2D负调控PARP1的表达 | 第71页 |
| ·DENND2D负调控PAR的表达 | 第71-72页 |
| 第五章 讨论 | 第72-76页 |
| 第六章 第一部分小结 | 第76-78页 |
| 第二部分 非小细胞肺癌中Brk1基因转录调控机制研究 | 第78-109页 |
| 第一章 导论 | 第78-81页 |
| 第二章 摘要 | 第81-83页 |
| 第三章 材料和方法 | 第83-89页 |
| 1. Brkl基因5’上游调控区系列片段重组荧光素酶报告基因表达载体构建 | 第83-85页 |
| ·引物设计 | 第83页 |
| ·PCR | 第83页 |
| ·PCR反应体系 | 第83页 |
| ·PCR反应条件 | 第83页 |
| ·PCR扩增产物凝胶回收与纯化 | 第83-84页 |
| ·pGL 4.26载体与PCR扩增产物双酶切 | 第84页 |
| ·DNA纯化 | 第84页 |
| ·重组表达载体的连接 | 第84-85页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第85页 |
| ·克隆培养及质粒提取 | 第85页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第85页 |
| ·阳性克隆测序确认 | 第85页 |
| 2. 双荧光素酶报告基因活性检测 | 第85-86页 |
| ·重组质粒细胞转染 | 第85-86页 |
| ·直接检测荧光素酶报告基因重组质粒所用质粒量 | 第86页 |
| ·转录因子刺激荧光素酶报告基因重组质粒所用质粒量 | 第86页 |
| ·双萤光素酶活性测定及数据分析 | 第86页 |
| 3. 统计学分析 | 第86-89页 |
| 第四章 实验结果 | 第89-104页 |
| 1. Brk1基因候选上游调控转录区预测与构建 | 第89页 |
| ·Brk1基因候选上游调控转录区预测 | 第89页 |
| ·Brk1基因候选上游调控转录区荧光素酶报告基因重组载体构建 | 第89页 |
| 2. Brk1基因候选上游调控转录区转录活性检测 | 第89-97页 |
| ·片段TL、F1、F3、F5和F8荧光素酶活性检测 | 第89-91页 |
| ·Brkl候选上游调控转录区系列截短体构建以及荧光素酶活性检测 | 第91-97页 |
| ·片段F3与F8截短体构建 | 第91页 |
| ·片段F31、F32、F81、F82以及F83的荧光素酶活性检测 | 第91-92页 |
| ·片段F31、F81和F83截短体构建 | 第92页 |
| ·14个片段的荧光素酶活性检测 | 第92-95页 |
| ·候选启动子区片段构建和活性检测 | 第95-97页 |
| 3. Brk1基因核心启动子区初步鉴定 | 第97-104页 |
| 第五章 讨论 | 第104-108页 |
| 第六章 第二部分小结 | 第108-109页 |
| 综述一：吸烟所致肺癌相关信号转导通路研究进展 | 第109-117页 |
| 参考文献 | 第117-125页 |
| 基金资助 | 第125-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
