| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·昆虫杆状病毒概述 | 第13-15页 |
| ·杆状病毒的分类及生活周期 | 第13页 |
| ·杆状病毒的分子结构研究进展 | 第13-14页 |
| ·家蚕核型多角体病毒的危害与防治 | 第14-15页 |
| ·启动子的研究 | 第15-20页 |
| ·启动子的结构和功能 | 第15-16页 |
| ·启动子的分类 | 第16-17页 |
| ·启动子的研究方法及应用 | 第17-18页 |
| ·昆虫启动子的研究及应用 | 第18-20页 |
| ·利用RNAi进行家蚕抗病育种研究进展 | 第20-25页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第20-21页 |
| ·siRNA的生成途径 | 第21-25页 |
| 第二章 引言 | 第25-29页 |
| ·研究背景 | 第25页 |
| ·研究意义 | 第25-26页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| ·BmNPV启动子的选择与克隆 | 第26页 |
| ·启动子活性检测 | 第26页 |
| ·39k启动子的序列与功能分析 | 第26页 |
| ·39k启动子的优化与改造 | 第26-27页 |
| ·家蚕细胞水平检测39k启动子shRNA干涉效果 | 第27页 |
| ·技术路线 | 第27-29页 |
| 第三章 候选启动子的确定 | 第29-39页 |
| ·材料试剂和方法步骤 | 第29-31页 |
| ·材料试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·主要试剂的配制 | 第30-31页 |
| ·方法步骤 | 第31-35页 |
| ·PCR扩增 | 第32页 |
| ·PCR产物回收 | 第32-33页 |
| ·目的片段与PGL3-Basic酶切纯化 | 第33页 |
| ·目的片段与PGL3-Basic连接 | 第33页 |
| ·连接产物转化 | 第33页 |
| ·阳性克隆斑的筛选 | 第33-34页 |
| ·阳性克隆斑的验证 | 第34页 |
| ·测序验证 | 第34页 |
| ·细胞转染 | 第34页 |
| ·启动子活性检测 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-38页 |
| ·启动子的选择 | 第35页 |
| ·启动子活性检测 | 第35-37页 |
| ·确定候选启动子 | 第37-38页 |
| ·小结与讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 BmNPV 39k启动子结构与功能 | 第39-49页 |
| ·材料试剂与方法步骤 | 第39-40页 |
| ·材料试剂 | 第39页 |
| ·方法步骤 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-46页 |
| ·BmNPV 39k启动子的克隆及序列分析 | 第40-42页 |
| ·BmNPV 39k启动子功能分析 | 第42-46页 |
| ·小结与讨论 | 第46-49页 |
| ·39k启动子的BmNPV诱导型转录 | 第46-47页 |
| ·39k启动子的重要区段-610～-419bp | 第47-49页 |
| 第五章 39k启动子的改造 | 第49-63页 |
| ·材料试剂与方法步骤 | 第49页 |
| ·材料试剂 | 第49页 |
| ·方法步骤 | 第49-50页 |
| ·载体构建 | 第49-50页 |
| ·荧光素酶相对比值的测定 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-60页 |
| ·重组质粒的构建 | 第50-52页 |
| ·hr3对39k启动子转录的增强作用 | 第52-53页 |
| ·hr5对39k启动子转录的增强作用 | 第53-54页 |
| ·polh-up对39k启动子转录的增强作用 | 第54-55页 |
| ·BmNPV polh-up、hr3联合对39k启动子转录的增强作用 | 第55-58页 |
| ·改造39k启动子驱动DsRed基因的表达与分析 | 第58-60页 |
| ·小结与讨论 | 第60-63页 |
| ·pu、hr3、hr5的增强作用 | 第60-63页 |
| 第六章 细胞水平39k启动子shRNA干涉效果检测 | 第63-71页 |
| ·材料试剂和方法步骤 | 第63-65页 |
| ·材料试剂 | 第63页 |
| ·方法步骤 | 第63-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-69页 |
| ·BmNPV 39k启动子PIZ/V5-hr3-pu-39k-shRNA干涉载体构建 | 第65-67页 |
| ·家蚕A4启动子表达载体PGL3-A4-luc-lef-1构建 | 第67页 |
| ·干涉效果检测 | 第67-69页 |
| ·小结与讨论 | 第69-71页 |
| ·靶基因干涉序列的设计选择 | 第69页 |
| ·启动子的选择 | 第69-71页 |
| 第七章 总结 | 第71-73页 |
| ·诱导型启动子39k启动子的筛选与克隆 | 第71页 |
| ·39k启动子的生物信息分析、缺失分析、转录时相分析 | 第71页 |
| ·39k启动子的优化与改造 | 第71-72页 |
| ·shRNA载体的构建和细胞水平干涉效果检测 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 附录 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 发表论文及参加课题一览表 | 第83页 |
