| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表(ABBREVATION) | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-32页 |
| ·L-丝氨酸 | 第13-14页 |
| ·理化性质 | 第13页 |
| ·应用及市场需求 | 第13-14页 |
| ·生产方法生产菌株及国内外研究进展 | 第14-21页 |
| ·直接提取法 | 第15页 |
| ·化学合成法 | 第15-16页 |
| ·生物合成法 | 第16-21页 |
| ·L-丝氨酸的酶法合成 | 第18-20页 |
| ·L-丝氨酸的直接发酵 | 第20-21页 |
| ·L-丝氨酸的定量检测 | 第21-22页 |
| ·E.coli DH5α中的乙醛酸循环 | 第22-26页 |
| ·外源基因在基因组上的整合 | 第26-31页 |
| ·Red同源重组系统 | 第26-27页 |
| ·整合子介导的基因组整合及基因重排 | 第27-28页 |
| ·大片段整合技术 | 第28-30页 |
| ·FLP/FRT位点专一性重组在外源基因整合基因组中的应用 | 第30-31页 |
| ·本论文的研究内容与意义 | 第31-32页 |
| 第二章 重组大肠杆菌合成L-丝氨酸的初步研究及FLP/FRT位点专一性重组在构建高产L-丝氨酸菌株中的应用 | 第32-75页 |
| ·引言 | 第32-34页 |
| ·实验材料 | 第34-45页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第34-40页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第40-42页 |
| ·培养基及相关试剂 | 第40-41页 |
| ·主要试剂和缓冲液 | 第41-42页 |
| ·常用生化试剂 | 第42-43页 |
| ·分子生物学常用工具酶 | 第43页 |
| ·常用试剂盒 | 第43页 |
| ·常用仪器设备 | 第43-45页 |
| ·实验方法 | 第45-57页 |
| ·菌种保藏 | 第45页 |
| ·PCR扩增及检测 | 第45-46页 |
| ·用DNA片段快速纯化回收试剂盒纯化PCR产物 | 第46-47页 |
| ·琼脂糖凝胶回收试剂盒回收琼脂糖凝胶产物 | 第47页 |
| ·质粒的提取 | 第47-49页 |
| ·E coli DH5α普通感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·E coli DH5α感受态细胞的普通转化 | 第49页 |
| ·基因敲除方法 | 第49-51页 |
| ·荧光定量PCR检测基因表达 | 第51-53页 |
| ·细菌总RNA的提取 | 第51-52页 |
| ·反转录得到cDNA | 第52-53页 |
| ·荧光定量PCR(qPCR) | 第53页 |
| ·发酵方法 | 第53-54页 |
| ·发酵样品参数测定 | 第54-57页 |
| ·发酵过程中糖浓度的测定 | 第54页 |
| ·细菌生长情况检测 | 第54-55页 |
| ·变色酸-分光光度法测发酵液中L-丝氨酸的含量 | 第55-56页 |
| ·高效液相色谱法对变色酸-分光光度法准确性的验证及对副产物含量的检测 | 第56-57页 |
| ·实验结果与讨论 | 第57-75页 |
| ·基因sdaA的敲除 | 第57页 |
| ·菌株Sp和SpTrc的构建 | 第57-60页 |
| ·不同质粒表达L-丝氨酸途径对L-丝氨酸产量及菌体代谢的影响 | 第60-62页 |
| ·菌株S中乙醛酸循环的开启 | 第62-65页 |
| ·乙醛酸循环的开启对L-丝氨酸积累及菌体代谢分布的影响 | 第65-68页 |
| ·利用FLP/FRT位点专一性重组人工构建L-丝氨酸操纵子 | 第68-70页 |
| ·在菌株3S中敲除recA基因 | 第68页 |
| ·质粒AsBCKR的构建 | 第68-69页 |
| ·L-丝氨酸操纵子在菌株3SR基因组上的整合及拷贝数的检测 | 第69-70页 |
| ·人工构建L-丝氨酸操纵子对L-丝氨酸产量的影响 | 第70-71页 |
| ·同一途径中的两个基因同时整合3SR基因组 | 第71-73页 |
| ·同一途径中两个基因拷贝数的不同对产物积累的影响 | 第73-75页 |
| 全文总结 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第88-89页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第89页 |
