| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| ·绒山羊及内蒙古阿尔巴斯绒山羊概述 | 第10页 |
| ·绒山羊特性及分布 | 第10页 |
| ·内蒙古阿尔巴斯绒山羊简介 | 第10页 |
| ·毛囊的结构、周期性生长及调控 | 第10-12页 |
| ·毛囊的结构与毛囊周期 | 第10-11页 |
| ·毛囊发育及周期性生长的分子调控 | 第11-12页 |
| ·内蒙古绒山羊毛囊生长特性及其调控 | 第12-13页 |
| ·内蒙古绒山羊毛被特点 | 第12页 |
| ·内蒙古绒山羊毛被周期性生长规律及其调控 | 第12-13页 |
| ·FGF家族及FGF5基因 | 第13-17页 |
| ·FGFs、FGFRs和FGF信号通路 | 第13-15页 |
| ·FGF5基因的发现及其可变剪接 | 第15-16页 |
| ·FGF5基因功能的研究进展 | 第16-17页 |
| ·基因敲除技术研究进展 | 第17-18页 |
| ·动物转基因技术及转基因方法小结 | 第17页 |
| ·基因打靶技术概述 | 第17-18页 |
| ·研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料、仪器设备、药品耗材及试剂配制 | 第19-22页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·动物材料 | 第19页 |
| ·FGF5基因打靶质粒载体 | 第19页 |
| ·仪器设备 | 第19-20页 |
| ·药品及耗材 | 第20页 |
| ·试剂配制 | 第20-22页 |
| 3 实验一 内蒙古阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞的获得 | 第22-27页 |
| ·方法 | 第22-23页 |
| ·内蒙古阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞的原代培养 | 第22页 |
| ·传代培养与成纤维细胞纯化 | 第22页 |
| ·细胞的冷冻保存 | 第22-23页 |
| ·细胞的解冻复苏 | 第23页 |
| ·细胞生长曲线的绘制 | 第23页 |
| ·结果 | 第23-25页 |
| ·原代培养、传代培养与成纤维细胞纯化 | 第23-25页 |
| ·内蒙古阿尔巴绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞生长曲线的绘制 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| ·胎儿皮肤成纤维细胞的原代培养 | 第25-26页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第26-27页 |
| 4 实验二 敲除FGP5基因的阿尔巴斯胎儿皮肤成纤维细胞系的建立 | 第27-47页 |
| ·方法 | 第27-35页 |
| ·细胞转染用FGF5基因打靶质粒载体的准备 | 第27-28页 |
| ·内蒙古阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞G418耐药性的检测 | 第28页 |
| ·阳离子脂质体介导的细胞转染 | 第28-29页 |
| ·细胞克隆的筛选、扩繁及冻存 | 第29页 |
| ·引物的设计与合成 | 第29-30页 |
| ·细胞基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·细胞总RNA的提取及反转录 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增及电泳检测 | 第32-35页 |
| ·结果 | 第35-44页 |
| ·FGF5基因打靶质粒载体的酶切线性化 | 第35页 |
| ·内蒙古阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞的G418耐药性 | 第35-37页 |
| ·细胞克隆的筛选、扩繁和冻存以及转染前后细胞状态的改变 | 第37-41页 |
| ·分子生物学鉴定 | 第41-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| ·细胞转染中质粒与脂质体比例对转染效率的影响 | 第44-45页 |
| ·正负双筛选策略及细胞克隆生长状态的改变 | 第45-46页 |
| ·细胞基因组DNA和总RNA的提取 | 第46页 |
| ·PCR扩增及电泳检测结果的分析 | 第46-47页 |
| 5 实验三 体细胞核移植克隆敲除FGF5基因的阿尔巴斯绒山羊 | 第47-52页 |
| ·方法 | 第47-48页 |
| ·山羊卵母细胞的收集及体外成熟 | 第47页 |
| ·敲除FGF5基因阳性细胞克隆的体细胞核移植 | 第47-48页 |
| ·电融合、孤雌激活、重构胚的体外发育及胚胎移植 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·供体细胞对体细胞核移植的影响 | 第50-51页 |
| ·受体细胞对体细胞核移植的影响 | 第51页 |
| ·敲除FGF5基因可能影响胚胎发育 | 第51-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
