| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1. 文献综述 | 第10-30页 |
| ·甘蔗的重要性 | 第10-12页 |
| ·重要的糖料作物 | 第10页 |
| ·重要的能源作物 | 第10-11页 |
| ·其它用途 | 第11-12页 |
| ·甘蔗虫害 | 第12页 |
| ·植物抗虫基因工程的研究进展 | 第12-25页 |
| ·雪花莲凝集素基因的研究进展 | 第14-17页 |
| ·雪花莲凝集素的定义,结构 | 第14-15页 |
| ·雪花莲凝集素的抗虫机理 | 第15页 |
| ·雪花莲凝集素基因的应用 | 第15-17页 |
| ·凝集素检测方法 | 第17页 |
| ·杀虫晶体蛋白的研究进展 | 第17-19页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的分类 | 第17页 |
| ·苏云金杆菌毒蛋白基因的杀虫机理 | 第17-18页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白基因的应用 | 第18-19页 |
| ·蛋白酶抑制剂基因 | 第19-20页 |
| ·淀粉酶抑制剂基因 | 第20-21页 |
| ·其它抗虫基因 | 第21-23页 |
| ·异戊烯转移酶基因(ipt) | 第21页 |
| ·胆固醇氧化酶基因 | 第21页 |
| ·动物的抗虫基因 | 第21-22页 |
| ·麦胚凝集素基因 | 第22页 |
| ·半夏凝集素基因 | 第22页 |
| ·几丁质酶基因及其应用 | 第22-23页 |
| ·植物抗虫基因工程存在的问题及其对策 | 第23-25页 |
| ·甘蔗遗传转化的国内外研究现状 | 第25-28页 |
| ·抗病性改良 | 第25页 |
| ·抗菌性改良 | 第25页 |
| ·抗虫性改良 | 第25-26页 |
| ·抗旱基因改良 | 第26-27页 |
| ·提高甘蔗蔗糖含量和改良蔗糖色泽的转基因研究 | 第27页 |
| ·甘蔗生物反应器研究进展 | 第27-28页 |
| ·本论文研究的目的、内容和技术路线 | 第28-30页 |
| ·研究目的 | 第28页 |
| ·研究内容 | 第28-29页 |
| ·技术路线 | 第29-30页 |
| 2. 材料与方法 | 第30-48页 |
| ·实验材料及试剂 | 第30-31页 |
| ·菌种与质粒 | 第30页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·实验室常用溶液及培养基配制 | 第31-32页 |
| ·培养基配制 | 第31页 |
| ·溶液配制 | 第31页 |
| ·抗生素及激素的配制 | 第31-32页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第32-39页 |
| ·构建策略 | 第32页 |
| ·pNU中间表达载体的构建 | 第32-37页 |
| ·载体质粒的大量提取与纯化 | 第32-33页 |
| ·载体质粒的酶切 | 第33-34页 |
| ·目的片段的回收 | 第34页 |
| ·目的片段(Ubi)与载体pNOS的连接 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35页 |
| ·重组质粒DNA的小量提取 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pUN的电泳分析 | 第36页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·重组菌pUN的保存 | 第36-37页 |
| ·植物表达载体pUNG的获得 | 第37-39页 |
| ·质粒pUN和GNA-T的提取 | 第37页 |
| ·酶切 | 第37-38页 |
| ·目的片段的回收 | 第38页 |
| ·回收片段的连接 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组质粒DNA的小量提取 | 第38页 |
| ·重组质粒pUNG的电泳分析 | 第38页 |
| ·重组质粒pUNG的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组菌pUNG的保存 | 第39页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第39-41页 |
| ·转化方法 | 第39-40页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·农杆菌感受态细胞的转化 | 第39-40页 |
| ·重组子PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·目的基因GNA的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·雪花莲凝集素基因遗传转化甘蔗 | 第41-44页 |
| ·甘蔗转化材料及其农杆菌菌液的准备 | 第41-42页 |
| ·甘蔗培养基的成分 | 第41-42页 |
| ·外植体的处理 | 第42页 |
| ·农杆菌菌液的准备 | 第42页 |
| ·转化材料的预处理 | 第42页 |
| ·农杆菌菌液浸染愈伤组织及共培养 | 第42-43页 |
| ·农杆菌浸染后的愈伤组织分化成苗 | 第43页 |
| ·甘蔗小植株的筛选培养 | 第43页 |
| ·甘蔗抗性苗的炼苗 | 第43-44页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第44-48页 |
| ·植物总DNA的小量提取 | 第44页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第44-46页 |
| ·Ubi启动子驱动的GNA基因转化植株的PCR检测 | 第44-45页 |
| ·Rbcs启动子驱动的GNA基因转化植株的PCR检测 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR检测 | 第46-47页 |
| ·转化植株的总RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·RT-PCR的扩增 | 第47页 |
| ·转化植株叶片蛋白提取液凝血活性测定 | 第47-48页 |
| 3. 结果与分析 | 第48-60页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第48-52页 |
| ·中间载体pUN的构建 | 第48-50页 |
| ·植物表达载体pUNG的构建 | 第50-51页 |
| ·植物表达载体导入农杆菌 | 第51-52页 |
| ·农杆菌介导的甘蔗转化 | 第52-55页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第55-60页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第55-56页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第56-57页 |
| ·Ubi启动子驱动的gna基因转化植株的PCR检测 | 第56-57页 |
| ·Rbcs启动子驱动的gna基因转化植株的PCR检测 | 第57页 |
| ·RNA的小量提取 | 第57-58页 |
| ·部分转化植株RT-PCR检测结果 | 第58-59页 |
| ·Ubi启动子驱动的gna基因部分转化植株的RT-PCR检测 | 第58页 |
| ·Rbcs启动子驱动的gna基因部分转化植株的RT-PCR检测 | 第58-59页 |
| ·凝血实验数据及SAS分析结果 | 第59-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-61页 |
| ·关于GNA基因 | 第60页 |
| ·关于叶肉特异表达启动子rbcs和玉米泛素基因ubi启动子 | 第60页 |
| ·关于转化及筛选 | 第60-61页 |
| 5. 结论 | 第61-62页 |
| 6. 本实验的后续工作 | 第62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 8. 缩写词(Abbreviation) | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
