| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 第一章 家畜转基因技术研究进展 | 第15-24页 |
| ·家畜和鱼类转基因技术 | 第15-17页 |
| ·新兴的转基因技术 | 第17-20页 |
| ·慢病毒介导转基因技术 | 第17页 |
| ·家畜的条件性转基因 | 第17-18页 |
| ·多潜能干细胞 | 第18-19页 |
| ·RNA 干扰介导的基因敲除 | 第19页 |
| ·大范围核酸酶与锌指核酸酶 | 第19页 |
| ·转座子技术 | 第19-20页 |
| ·转基因技术家畜中的应用 | 第20-23页 |
| ·转基因家畜在基础生物医学上的应用 | 第20-21页 |
| ·转基因动物技术在农业中的应用 | 第21-23页 |
| ·转基因家畜的健康和福利 | 第23-24页 |
| 第二章 piggyBac 转座子技术研究进展 | 第24-29页 |
| ·piggyBac 转座子的构造 | 第25页 |
| ·piggyBac 转座子发生转座的机制 | 第25-26页 |
| ·piggyBac 转座子的转座特性 | 第26-27页 |
| ·插入位点 | 第26-27页 |
| ·TTAA 位点切离 | 第27页 |
| ·piggyBac 转座子与生物进化 | 第27页 |
| ·piggyBac 转座子的应用 | 第27-29页 |
| ·非病毒介导的表达载体 | 第27页 |
| ·piggyBac 转座子可用于疾病基因治疗 | 第27-28页 |
| ·piggyBac 转座子可作为基因诱变工具 | 第28-29页 |
| 第三章 半胱氨酸研究进展 | 第29-33页 |
| ·半胱氨酸的生理作用 | 第29页 |
| ·半胱氨酸与动物营养 | 第29页 |
| ·半胱氨酸与羊毛、羊绒生长 | 第29-30页 |
| ·半胱氨酸的合成酶基因 | 第30-31页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第31-32页 |
| ·克隆半胱氨酸合成酶基因使之在绒山羊体内表达 | 第31页 |
| ·研究 piggyBac 转座子在绒山羊基因组中的整合特性 | 第31-32页 |
| ·本研究的技术路线 | 第32-33页 |
| 第四章 半胱氨酸合成酶基因的克隆及原核表达 | 第33-43页 |
| ·材料与方法 | 第33-40页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-42页 |
| ·大肠杆菌 DNA 提取结果 | 第40页 |
| ·半胱氨酸合成酶基因 cysE 和 cysM 克隆 | 第40-41页 |
| ·cysE 和 cysM 基因序列结果及分析 | 第41页 |
| ·cysE 和 cysM 基因的原核表达 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42页 |
| ·半胱氨酸合成酶基因 cysE、cysM 克隆 | 第42页 |
| ·半胱氨酸合成酶基因 cysE、cysM 的原核表达 | 第42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第五章 cysE、cysM 红色、绿色荧光蛋白真核载体构建 | 第43-49页 |
| ·材料与方法 | 第43-46页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-47页 |
| ·质粒 pIRES2-Red2-cysE 的构建 | 第46页 |
| ·质粒 pIRES2-EGFP-cysM 的构建 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·cysE 和 cysM 红色、绿色荧光蛋白表达载体构建 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第六章 cysE 和 cysM 基因在绒山羊成纤维细胞和胚胎中的表达 | 第49-55页 |
| ·材料与方法 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞分离培养 | 第51-52页 |
| ·倒置荧光显微镜下转染效果检测 | 第52页 |
| ·转基因细胞 PCR 鉴定 | 第52-53页 |
| ·倒置荧光显微镜下转基因胚胎检测 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 第七章 绒山羊瘤胃特异表达 cysE、cysM 基因 piggyBac 转座子表达载体构建 | 第55-66页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·菌种、质粒 | 第55页 |
| ·基因合成 | 第55页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第55-56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| ·piggyBac 转座子载体改造 | 第56-57页 |
| ·转座酶辅助载体改造 | 第57-58页 |
| ·绒山羊瘤胃特异表达启动子克隆 | 第58页 |
| ·cysE 和 cysM 密码子优化及合成 | 第58页 |
| ·绒山羊瘤胃特异表达 cysE、cysM 基因 piggyBac 转座子表达载体构建 | 第58页 |
| ·载体克隆方法 | 第58页 |
| ·载体构建的检测 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-64页 |
| ·piggyBac 转座子载体改造 | 第58-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·piggyBac 转座子系统启动子改造 | 第64页 |
| ·cysE、cysM 密码子优化 | 第64-65页 |
| ·瘤胃特异表达启动子的选择 | 第65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第八章 反向 PCR 检测 piggyBac 转座子在绒山羊基因组中的整合位点 | 第66-72页 |
| ·材料与方法 | 第66-67页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·菌种、质粒和引物、成纤维细胞 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67页 |
| ·PB 转座子载体系统共转染绒山羊胎儿成纤维细胞 | 第67页 |
| ·piggyBac 转座子在绒山羊基因组中整合位点研究 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-70页 |
| ·piggyBac 转座子载体系统转染绒山羊胎儿成纤维细胞 | 第67-68页 |
| ·整合位点检测 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·结论 | 第71-72页 |
| 第九章 piggyBac 转座子介导 cysE 和 cysM 基因在绒山羊胎儿成纤维细胞中的表达 | 第72-80页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·菌种、质粒和引物 | 第72-73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-75页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞分离和培养 | 第73页 |
| ·PB 转座子载体系统共转染绒山羊胎儿成纤维细胞 | 第73-74页 |
| ·Splinkerette PCR 检测 PB 转座子在绒山羊基因组中整合位点 | 第74页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测外源基因表达 | 第74-75页 |
| ·结果 | 第75-78页 |
| ·piggyBac 转座子载体系统转染绒山羊胎儿成纤维细胞 | 第75页 |
| ·Splinkerette PCR 检测 piggyBac 转座子在绒山羊基因组中整合位点 | 第75-77页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测外源基因表达 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 第十章 piggyBac 转座子介导生产转 cysE 和 cysM 基因绒山羊研究 | 第80-89页 |
| ·材料与方法 | 第80-82页 |
| ·菌种、质粒和引物 | 第80页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞及卵母细胞 | 第80页 |
| ·受体母羊 | 第80-81页 |
| ·主要试验试剂 | 第81页 |
| ·主要仪器设备 | 第81页 |
| ·方法 | 第81-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-87页 |
| ·倒置荧光显微镜下转染效果检测 | 第82-83页 |
| ·倒置荧光显微镜下转基因胚胎检测 | 第83页 |
| ·转 cysE 和 cysM 基因克隆绒山羊的产生 | 第83-84页 |
| ·荧光蛋白观察仪下检测绿色荧光蛋白基因表达 | 第84-85页 |
| ·转基因绒山羊 PCR 鉴定 | 第85-86页 |
| ·Splinkerette PCR 检测整合位点 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-88页 |
| ·小结 | 第88-89页 |
| 第十一章 结论 | 第89-91页 |
| ·研究结论 | 第89页 |
| ·本研究创新点 | 第89-90页 |
| ·还需深入研究的内容 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 附录 | 第99-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105页 |
