| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 前言 | 第5-17页 |
| 1．1 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF） | 第5-12页 |
| 1．2 巴斯德毕赤氏酵母表达系统 | 第12-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-30页 |
| 2．1 材料 | 第17页 |
| 2．2 毕赤氏酵母/hGM-CSF工程菌的构建 | 第17-24页 |
| 2．2．1 pGAPZα-A/hGM-CSF重组载体的构建 | 第17-21页 |
| 2．2．1．1 hGM-CSF基因片段的制备 | 第17-18页 |
| 2．2．1．2 线性化pGAPZα-A载体的制备 | 第18页 |
| 2．2．1．3 线性化载体与hGM-CSF基因片段的连接 | 第18-19页 |
| 2．2．1．4 pGAPZα-A/hGM-CSF重组载体的鉴定 | 第19-21页 |
| 2．2．2 PGAPZα-A/hGM-CSF重组载体转化毕赤氏酵母及工程菌的鉴定 | 第21-24页 |
| 2．2．2．1 重组载体的线性化 | 第21页 |
| 2．2．2．2 毕赤氏酵母感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| 2．2．2．3 酵母的转化 | 第22页 |
| 2．2．2．4 毕赤氏酵母/hGM-CSF工程菌的斑点杂交检测 | 第22-24页 |
| 2．3 毕赤氏酵母/hGM-CSF工程菌的表达分析 | 第24-30页 |
| 2．3．1 工程菌分泌表达蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第24-28页 |
| 2．3．1．1 所需试剂的配制 | 第24-25页 |
| 2．3．1．2 蛋白质样品的制备 | 第25-26页 |
| 2．3．1．3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备及电泳 | 第26-27页 |
| 2．3．1．4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶的电泳后染色 | 第27页 |
| 2．3．1．5 工程菌主带蛋白质相对分子量的测定 | 第27-28页 |
| 2．3．1．6 工程菌主带蛋白质表达量的测定 | 第28页 |
| 2．3．2 工程菌分泌表达蛋白质的活性检测 | 第28-30页 |
| 2．3．2．1 所需试剂的配制 | 第28-29页 |
| 2．3．2．2 活性检测 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-33页 |
| 3．1 毕赤氏酵母/hGM-CSF工程菌的构建结果 | 第30页 |
| 3．1．1 pGAPZα-A/hGM-CSF重组载体的构建结果 | 第30页 |
| 3．1．2 pGAPZα-A/hGM-CSF重组载体转化毕赤氏酵母及工程菌的鉴定结果 | 第30页 |
| 3．2 毕赤氏酵母/hGM-CSF工程菌的表达分析结果 | 第30-33页 |
| 3．2．1 工程菌分泌表达蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第30-32页 |
| 3．2．1．1 工程菌主带蛋白质相对分子量的测定结果 | 第30-31页 |
| 3．2．1．2 工程菌主带蛋白质表达量的测定结果 | 第31-32页 |
| 3．2．2 工程菌分泌表达蛋白质的活性检测结果 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-36页 |
| 4．1 hGM-CSF在毕赤氏酵母中成功表达的意义 | 第33-34页 |
| 4．2 进一步提高毕赤氏酵母中hGM-CSF表达量的设想 | 第34-36页 |
| 附图 | 第36-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 英文摘要 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
