| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-26页 |
| ·伪狂犬病病毒的分子结构 | 第8-10页 |
| ·伪狂犬病病毒基因组的转录与复制 | 第10-11页 |
| ·伪狂犬病病毒的潜伏感染与神经嗜性 | 第11-13页 |
| ·gI基因的结构与功能 | 第13-17页 |
| ·gI／gE复合体 | 第17-19页 |
| ·伪狂犬病的危害与防治 | 第19-21页 |
| ·gI及gI／gE复合体在根除计划中的作用 | 第21-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·材料 | 第26-30页 |
| ·病毒及细胞: | 第26页 |
| ·质粒及菌株 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·酶及试剂盒: | 第27页 |
| ·抗生素: | 第27-28页 |
| ·质粒抽提相关溶液: | 第28页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blot相关溶液 | 第28-29页 |
| ·ELISA相关溶液 | 第29页 |
| ·其它 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-39页 |
| ·大肠杆菌(E.coli)感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·质粒的少量制备 | 第30-31页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法)及PEG纯化 | 第31页 |
| ·DNA胶内回收试剂盒的使用 | 第31-32页 |
| ·DNA重组技术(DNA酶切、连接) | 第32页 |
| ·序列测定 | 第32页 |
| ·大肠杆菌BL(DE3)的表达诱导与样本处理 | 第32页 |
| ·BHK-21与PK-15细胞的培养 | 第32页 |
| ·哺乳动物细胞的转染 | 第32-33页 |
| ·PK-15及BHK-21细胞系最适G418浓度的测定 | 第33页 |
| ·gI表达细胞系的筛选 | 第33页 |
| ·细胞模板的处理 | 第33页 |
| ·gI基因的PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·间接免疫荧光法检测表达产物 | 第34页 |
| ·病毒组织培养半数感染(TCID50)测定 | 第34-35页 |
| ·空斑实验 | 第35页 |
| ·穿梭质粒在大肠杆菌DH10Bac中的转座 | 第35页 |
| ·Bacmid的制备 | 第35-36页 |
| ·重组Bacmid转染Sf9细胞 | 第36页 |
| ·重组杆状病毒在Hif细胞上的表达 | 第36页 |
| ·杆状病毒的增殖 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第36页 |
| ·Western印迹分析 | 第36-37页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第37页 |
| ·gE基因的PCR鉴定 | 第37-39页 |
| 3 结果 | 第39-57页 |
| ·gI基因全序列的克隆 | 第39-40页 |
| ·gI基因的核苷酸序列的测定与比较 | 第40-42页 |
| ·gI氨基酸序列的比较分析 | 第42-43页 |
| ·gI原核表达质粒的构建及鉴定 | 第43-45页 |
| ·gI基因的原核表达 | 第45页 |
| ·真核表达质粒的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| ·正常PK-15及BHK-21细胞系G418最适致死浓度的确定 | 第46页 |
| ·表达gI的PK-15及BHK-21细胞系的建立及PCR检测 | 第46-47页 |
| ·gI基因在PK-15及HBK-21中的表达及检测 | 第47-48页 |
| ·空斑试验 | 第48-49页 |
| ·TCID_(50)的测定 | 第49-50页 |
| ·转座质粒pFBI的构建与鉴定 | 第50-51页 |
| ·gI重组Bacmid的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·gI重组病毒的PCR鉴定 | 第52页 |
| ·gI基因在昆虫细胞中表达产物的检测 | 第52页 |
| ·鉴别ELISA | 第52-54页 |
| ·含gI、gE基因的转座质粒pFBDIE的构建与鉴定 | 第54页 |
| ·重组Bacmid的PCR鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组病毒的PCR鉴定 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-65页 |
| ·gI基因的克隆与测序 | 第57页 |
| ·gI基因的原核表达 | 第57-58页 |
| ·gI基因表达细胞系的筛选与建立 | 第58页 |
| ·gI对病毒在细胞培养物中增殖的影响 | 第58-59页 |
| ·gI在杆状病毒表达系统中的表达 | 第59页 |
| ·鉴别ELISA方法的初步研究 | 第59-61页 |
| ·gI、gE共表达重组杆状病毒的构建与鉴别ELISA | 第61页 |
| ·gI基因的PCR扩增 | 第61-62页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第62-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 英文摘要 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
