缩略词表 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-12页 |
Abstract | 第12-16页 |
前言 | 第16-18页 |
第一部分 材料与方法 | 第18-24页 |
1. 材料及来源 | 第18-19页 |
·菌株、质粒和干涉序列 | 第18页 |
·主要试剂和抗体 | 第18-19页 |
2. 实验方法 | 第19-24页 |
·质粒构建 | 第19页 |
·细胞培养和转染 | 第19页 |
·细胞同步化方法 | 第19页 |
·Time Lapse 图像采集方法 | 第19-20页 |
·蛋白纯化方法 | 第20页 |
·免疫共沉淀实验 | 第20-21页 |
·Western Blot 蛋白印记杂交 | 第21页 |
·免疫荧光染色实验 | 第21-22页 |
·免疫荧光定量方法 | 第22页 |
·统计学方法 | 第22页 |
·免疫组织化学实验 | 第22-24页 |
第二部分 结果 | 第24-50页 |
1.CUEDC2 可在有丝分裂期发生磷酸化的修饰 | 第24-29页 |
·CUEDC2 在不同细胞系的有丝分裂期发生磷酸化修饰 | 第24-26页 |
·质谱鉴定CUEDC2 的磷酸化修饰位点 | 第26-27页 |
·CDK1 为CUEDC2 在有丝分裂期的上游激酶 | 第27-29页 |
2. 磷酸化的CUEDC2 调控有丝分裂中期至后期的转化 | 第29-34页 |
·干涉CUEDC2 延长了细胞有丝分裂从核膜破裂到后期开始的时间 | 第29-31页 |
·干涉CUEDC2 导致细胞有丝分裂中期阻滞 | 第31页 |
·干涉CUEDC2 造成的有丝分裂中期阻滞并非由于干涉脱靶造成 | 第31-32页 |
·磷酸化的CUEDC2 作用于有丝分裂中期到后期的转化 | 第32-34页 |
3. 干涉CUEDC2 并不影响纺锤体检查点的激活 | 第34-39页 |
·干涉CUEDC2 不影响多极纺锤体的形成 | 第34页 |
·干涉CUEDC2 不影响纺锤体的形态及着丝点内张力 | 第34-36页 |
·干涉CUEDC2 不影响微管与着丝粒之间的附着 | 第36-38页 |
·CUEDC2 在有丝分裂期的定位提示其不影响纺锤体检查点的激活 | 第38-39页 |
4. 磷酸化的CUEDC2 是APC/C-MCC 复合体的一个调节组分 | 第39-42页 |
·CUEDC2 通过Mad2 对APC/C 进行调控 | 第39-40页 |
·磷酸化的CUEDC2 可与Cdc20 在体外直接相互作用 | 第40-41页 |
·磷酸化的CUEDC2 可与Cdc20 在体内相互作用 | 第41-42页 |
5. 过表达CUEDC2 可导致纺锤体检查点的提前灭活以及染色体的错误分离 | 第42-45页 |
·过表达CUEDC2 可导致纺锤体检查点的提前灭活 | 第42-44页 |
·过表达CUEDC2 可导致有丝分裂后期染色体的错误分离 | 第44-45页 |
6.CUEDC2 在人体肿瘤中表达量升高 | 第45-50页 |
·验证CUEDC2 抗体的特异性 | 第45-46页 |
·CUEDC2 在人肾癌中表达量升高 | 第46-47页 |
·CUEDC2 在人卵巢癌中表达量升高 | 第47-50页 |
讨论 | 第50-52页 |
结论 | 第52-54页 |
参考文献 | 第54-60页 |
综述 | 第60-72页 |
参考文献 | 第66-72页 |
个人简历 | 第72-74页 |
致谢 | 第74-75页 |