| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| ·植酸与植酸酶 | 第12-16页 |
| ·植酸 | 第12-13页 |
| ·植酸酶 | 第13-14页 |
| ·植酸酶的应用 | 第14-16页 |
| ·植酸酶的研究进展 | 第16-26页 |
| ·植酸酶的来源 | 第16-18页 |
| ·植酸酶的分类 | 第18-22页 |
| ·植酸酶的性质 | 第22-25页 |
| ·植酸酶目前的研究热点 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第26-27页 |
| 第二章 产植酸酶菌株的筛选和部分片段的克隆 | 第27-39页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第27-28页 |
| ·所用培养基 | 第28页 |
| ·溶液 | 第28页 |
| ·简并引物 | 第28页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第28-29页 |
| ·主要实验仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-33页 |
| ·产酶菌株的筛选 | 第29页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第29页 |
| ·植酸酶序列比对及保守位点的确定 | 第29-30页 |
| ·简并引物的设计 | 第30页 |
| ·细菌基因组的提取(参照细菌基因组提取试剂盒说明书，天根公司) | 第30页 |
| ·植酸酶基因片段的克隆 | 第30-32页 |
| ·DNA片段的回收(参照DNA回收试剂盒说明书，天根公司) | 第32页 |
| ·DNA片段的连接和转化 | 第32-33页 |
| ·重组子筛选 | 第33页 |
| ·DNA测序 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-38页 |
| ·产酶菌株的筛选 | 第33-34页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·植酸酶序列比对及保守区域的确定 | 第35-36页 |
| ·简并引物的设计 | 第36-37页 |
| ·植酸酶编码基因序列片段的克隆 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 五个植酸酶基因全长序列的克隆及其分析 | 第39-57页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·菌株与质粒 | 第39页 |
| ·引物合成 | 第39页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第39页 |
| ·培养基和溶液 | 第39页 |
| ·实验仪器 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-46页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·植酸酶基因完整序列的克隆 | 第40-46页 |
| ·植酸酶基因序列的拼接及分析 | 第46页 |
| ·实验结果与讨论 | 第46-56页 |
| ·植酸酶基因完整序列的克隆及其序列分析 | 第46-53页 |
| ·基因组文库的构建和筛选 | 第53-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 来源于Pectobacterium wasabiae B189 的组氨酸酸性植酸酶基因的表达、重组蛋白的纯化及其酶学性质分析 | 第57-72页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·菌株与质粒 | 第57页 |
| ·引物合成 | 第57页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·实验仪器 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-63页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第58页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和电击转化 | 第58-59页 |
| ·重组植酸酶的原核表达及检测 | 第59-60页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第60页 |
| ·重组植酸酶的纯化 | 第60-61页 |
| ·重组植酸酶酶学性质的分析 | 第61-63页 |
| ·实验结果 | 第63-71页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第63页 |
| ·phyB189 基因在大肠杆菌中的表达 | 第63-64页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第64-65页 |
| ·重组植酸酶r-PhyB189 蛋白的纯化 | 第65-66页 |
| ·重组植酸酶r-PhyB189 酶学性质的研究 | 第66-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 第五章 来源于Pedobacter sp. MJ11 的β-折叠桶植酸酶基因的表达、重组蛋白的纯化及其酶学性质的分析 | 第72-84页 |
| ·实验材料 | 第72-73页 |
| ·菌株与质粒 | 第72页 |
| ·引物合成 | 第72页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第72页 |
| ·培养基 | 第72页 |
| ·实验仪器 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-76页 |
| ·大肠表达载体的构建 | 第73页 |
| ·植酸酶的表达及检测 | 第73-74页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第74页 |
| ·重组植酸酶蛋白的纯化 | 第74-75页 |
| ·重组植酸酶酶学性质的分析 | 第75-76页 |
| ·实验结果 | 第76-83页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第76页 |
| ·phyMJ11 基因在大肠杆菌中的表达 | 第76-77页 |
| ·重组植酸酶r-PhyMJ11 的纯化 | 第77-78页 |
| ·重组植酸酶r-PhyMJ11 酶学性质 | 第78-83页 |
| ·本章小结 | 第83-84页 |
| 第六章 讨论 | 第84-88页 |
| ·植酸酶基因的来源 | 第84-85页 |
| ·植酸酶基因的克隆及序列分析 | 第85-86页 |
| ·植酸酶基因的克隆方法 | 第85页 |
| ·植酸酶基因及其表达 | 第85-86页 |
| ·植酸酶性质分析 | 第86-88页 |
| ·重组组氨酸酸性植酸酶r-PhyB189 的性质比较分析 | 第86-87页 |
| ·重组β-折叠桶植酸酶r-PhyMJ11 的性质比较分析 | 第87-88页 |
| 第七章 全文结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 作者简历 | 第100页 |
