抗病相关基因转化马铃薯及其表达的初步研究
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩写及中英文对照 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-12页 |
| ·研究的目的和意义 | 第11-12页 |
| 2 文献综述 | 第12-23页 |
| ·几种常用的基因转化方法 | 第12-14页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第12-13页 |
| ·基因枪介导法 | 第13-14页 |
| ·花粉管通道法 | 第14页 |
| ·PEG法 | 第14页 |
| ·马铃薯转基因研究现状 | 第14-23页 |
| ·抗真菌病的研究 | 第14-16页 |
| ·Harpin蛋白基因和prp.1基因的作用 | 第14-15页 |
| ·几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因的利用 | 第15页 |
| ·利用其他植物的抗病基因 | 第15页 |
| ·小抗茵肽的开发利用 | 第15-16页 |
| ·活性氧产生酶基因的利用 | 第16页 |
| ·抗病毒的研究 | 第16-18页 |
| ·CP基因在马铃薯抗病毒病中的应用 | 第17页 |
| ·利用病毒复制酶基因介导的抗病性 | 第17页 |
| ·核酶基因介导的抗性 | 第17页 |
| ·RNA和反义RNA介导的抗性 | 第17-18页 |
| ·马铃薯自身的抗病基因 | 第18页 |
| ·抗细菌病研究 | 第18页 |
| ·抗虫性的研究 | 第18-19页 |
| ·改良品质的研究 | 第19页 |
| ·作为生物反应器的研究 | 第19-20页 |
| ·转基因植株的筛选与检测 | 第20-21页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第20页 |
| ·转基因植株的检测 | 第20-21页 |
| ·转基因马铃薯的生物安全性评价和展望 | 第21-23页 |
| ·生态环境安全性 | 第21-22页 |
| ·食品安全性 | 第22-23页 |
| 3 材料和方法 | 第23-30页 |
| ·供试材料 | 第23-25页 |
| ·农杆菌培养和菌液制备 | 第25页 |
| ·菌株培养 | 第25页 |
| ·菌液制备 | 第25页 |
| ·马铃薯基因转化受体系统的建立 | 第25-27页 |
| ·获得一致的基础苗 | 第25-26页 |
| ·马铃薯高频再生系统的建立 | 第26页 |
| ·培养方法 | 第26页 |
| ·供试培养基配方 | 第26页 |
| ·脱菌抗生素的筛选 | 第26页 |
| ·马铃薯外植体对卡那霉素敏感性试验 | 第26-27页 |
| ·愈伤组织诱导阶段Km选择压的确定 | 第26-27页 |
| ·生根过程中Km选择压的确定 | 第27页 |
| ·根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化 | 第27-28页 |
| ·外植体的预培养 | 第27页 |
| ·农杆菌浓度和侵染时间的确定 | 第27页 |
| ·共培养时间的确定 | 第27页 |
| ·选择培养方法的确定 | 第27页 |
| ·其它因素对转化的影响 | 第27-28页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第28-29页 |
| ·简易法小量提取基因组DNA | 第28页 |
| ·抗性马铃薯的PCR检测 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的凝胶电泳 | 第29页 |
| ·转化植株抗病性的初步鉴定 | 第29-30页 |
| 4 结果分析 | 第30-42页 |
| ·马铃薯基因转化受体系统的建立 | 第30-33页 |
| ·马铃薯高频再生系统的建立 | 第30-33页 |
| ·脱菌抗生素的筛选 | 第33页 |
| ·马铃薯外植体对卡那霉素敏感性试验 | 第33-34页 |
| ·愈伤组织诱导阶段Km选择压的确定 | 第33页 |
| ·生根过程中Km选择压的确定 | 第33-34页 |
| ·根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化 | 第34-39页 |
| ·外植体的预培养 | 第34-35页 |
| ·农杆菌浓度和侵染时间的确定 | 第35页 |
| ·共培养时间的确定 | 第35-36页 |
| ·选择培养方法的确定 | 第36-37页 |
| ·其它因素对转化的影响 | 第37-39页 |
| ·外植体的生理状况对转化的影响 | 第37页 |
| ·外植体类型对转化的影响 | 第37-38页 |
| ·AS对转化的影响 | 第38页 |
| ·Ca~(2+)对转化的影响 | 第38-39页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第39-41页 |
| ·转化植株抗病性的初步鉴定 | 第41-42页 |
| 5 结论与展望 | 第42-43页 |
| ·主要结论 | 第42页 |
| ·主要创新点 | 第42页 |
| ·展望 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 附录1 MS培养基配方 | 第47页 |
| 附录2 主要仪器 | 第47页 |
| 附录3 主要试剂 | 第47-48页 |
| 附录4 试剂与缓冲液的配制 | 第48-49页 |
| 附录5 DNA Marker示意图 | 第49-50页 |
| 附图1-12 | 第50-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
