| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第15-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-44页 |
| ·嗜水气单胞菌的生物学特性及血清分型 | 第16-17页 |
| ·嗜水气单胞菌流行病学及病理学特征 | 第17-18页 |
| ·嗜水气单胞菌的毒力因子 | 第18-23页 |
| ·嗜水气单胞菌胞外产物 | 第19-20页 |
| ·嗜水气单胞菌胞内产物及其它 | 第20-23页 |
| ·细菌Ⅲ型分泌系统研究进展 | 第23-26页 |
| ·鱼用疫苗 | 第26-38页 |
| ·鱼用传统型疫苗 | 第27-29页 |
| ·鱼用新型疫苗 | 第29-32页 |
| ·鱼用疫苗免疫佐剂 | 第32-35页 |
| ·鱼用疫苗接种方式 | 第35-36页 |
| ·鱼用疫苗的研究方向 | 第36-38页 |
| ·细菌突变株构建方法的研究进展 | 第38-41页 |
| ·自然突变 | 第38页 |
| ·人工常规诱变 | 第38-39页 |
| ·分子生物学方法 | 第39-41页 |
| ·细菌基因缺失技术 | 第41-44页 |
| ·正向筛选方法 | 第41页 |
| ·负向筛选方法 | 第41-44页 |
| 第2章 研究的目的与意义 | 第44-45页 |
| 第3章 材料与方法 | 第45-66页 |
| ·实验材料 | 第45-52页 |
| ·质粒、菌株和培养条件 | 第45-49页 |
| ·工具酶和试剂 | 第49页 |
| ·主要培养基及抗生素的配制 | 第49页 |
| ·主要溶液的配制 | 第49-50页 |
| ·细菌基因组DNA提取试剂 | 第50-51页 |
| ·实验动物 | 第51页 |
| ·引物 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-66页 |
| ·嗜水气单胞菌基因组DNA提取 | 第52页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第52页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第52页 |
| ·连接产物的转化 | 第52-53页 |
| ·重组质粒的快速鉴定 | 第53页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第53页 |
| ·质粒的制备 | 第53-54页 |
| ·嗜水气单胞菌Ah2056的鉴定 | 第54页 |
| ·嗜水气单胞菌Ah2056的药敏试验 | 第54页 |
| ·大肠杆菌X 7213介导的接合转化法 | 第54-55页 |
| ·大肠杆菌S 17-1介导的接合转化法 | 第55页 |
| ·嗜水气单胞菌电转化 | 第55-56页 |
| ·嗜水气单胞菌ELISA检测方法的建立 | 第56-57页 |
| ·枯草芽孢杆菌原核表达 | 第57-59页 |
| ·嗜水气单胞菌Ah2056株aopB/aopD及aroA基因前后臂片段的克隆与鉴定 | 第59页 |
| ·重组自杀性质粒pREaopB/aopD、pSUParoA的构建 | 第59-61页 |
| ·缺失株的构建和筛选鉴定 | 第61-63页 |
| ·缺失株生物学特性鉴定 | 第63-64页 |
| ·缺失株对银鲫的免疫试验 | 第64-65页 |
| ·缺失株对银鲫的保护试验 | 第65-66页 |
| 第4章 结果与分析 | 第66-91页 |
| ·嗜水气单胞菌AH2056的鉴定 | 第66-67页 |
| ·嗜水气单胞菌AH2056药物筛选结果 | 第67页 |
| ·重组自杀性质粒PREAOPB/AOPD、PSUPAROA的构建 | 第67-78页 |
| ·重组自杀性质粒pREaopB/aopD的构建 | 第67-73页 |
| ·重组自杀性质粒pSUParoA的构建 | 第73-78页 |
| ·缺失株的筛选与鉴定 | 第78-81页 |
| ·aopB~-/aopD~-缺失株的筛选与鉴定 | 第78-80页 |
| ·aopB~-/aopD~-/aroA~-缺失株的筛选与鉴定 | 第80-81页 |
| ·嗜水气单胞菌电转化缺失株的筛选与鉴定 | 第81页 |
| ·缺失株生物学特性鉴定 | 第81-87页 |
| ·缺失株生化特性鉴定 | 第81-82页 |
| ·缺失株胞外毒力因子的检测 | 第82页 |
| ·缺失株对细胞毒力的检测 | 第82-83页 |
| ·缺失株生长特征鉴定 | 第83-84页 |
| ·缺失株对银鲫的毒力试验 | 第84页 |
| ·缺失株对银鲫的免疫试验 | 第84-86页 |
| ·缺失株对银鲫的保护试验 | 第86-87页 |
| ·嗜水气单胞菌外膜蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第87-91页 |
| ·启动子P43与基因ompTS的PCR扩增及鉴定 | 第87-89页 |
| ·pNWP_(43)omp穿梭表达载体的构建和鉴定 | 第89-90页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达的SDS-PAGE和Western blot鉴定 | 第90-91页 |
| 第5章 讨论 | 第91-98页 |
| ·致病菌的鉴定 | 第92页 |
| ·致病菌缺失基因的选择 | 第92-93页 |
| ·基因缺失株构建方法的选择 | 第93-95页 |
| ·缺失株的毒力 | 第95页 |
| ·缺失株的对银鲫的免疫试验 | 第95页 |
| ·缺失株的对银鲫的保护试验 | 第95-96页 |
| ·嗜水气单胞菌外膜蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第96-98页 |
| 第6章 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
