| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-31页 |
| ·引言 | 第14页 |
| ·Bt基因及其应用 | 第14-15页 |
| ·植物蛋白酶抑制剂基因及其应用 | 第15-18页 |
| ·植物凝集素及在抗虫基因工程中的应用 | 第18-25页 |
| ·植物凝集素的分类 | 第19-20页 |
| ·植物凝集素具有很高的稳定性 | 第20页 |
| ·植物凝集素的抗病虫机理 | 第20-24页 |
| ·已克隆的植物凝集素基因特征 | 第24-25页 |
| ·作物转基因抗虫育种的现状 | 第25-29页 |
| ·作物转基因抗虫育种中存在的问题 | 第25-27页 |
| ·解决问题的策略 | 第27-28页 |
| ·目前获得转双价抗虫基因植物的主要方法 | 第28-29页 |
| ·本项目研究的目的意义 | 第29-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-45页 |
| ·菌株与质粒 | 第31页 |
| ·培养基及生长条件 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·生长条件 | 第32页 |
| ·菌种保存 | 第32页 |
| ·抗菌素 | 第32-33页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第33-35页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第35页 |
| ·质粒大量提取 | 第35-36页 |
| ·质粒纯化 | 第36-37页 |
| ·酚/氯仿抽提 | 第36页 |
| ·分光光度法测定DNA浓度 | 第36-37页 |
| ·电泳 | 第37页 |
| ·DNA酶切 | 第37-38页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切 | 第37页 |
| ·酶切DNA片段的CIP处理 | 第37-38页 |
| ·T4 DNA聚合酶补平 | 第38页 |
| ·DNA片段的分离与回收 | 第38-39页 |
| ·DNA连接 | 第39页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第39-40页 |
| ·用CaCl_2法制备及转化感受态细胞 | 第39页 |
| ·转化反应 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增DNA片段 | 第40页 |
| ·质粒DNA转化根癌农杆菌 | 第40-41页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·冻融法转化根癌农杆菌 | 第40页 |
| ·农杆菌Ti质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第41-42页 |
| ·农杆菌的培养 | 第41页 |
| ·烟草无菌苗的准备 | 第41页 |
| ·转化烟草植株的获得 | 第41-42页 |
| ·植物DNA的抽提 | 第42页 |
| ·β-葡糖苷酸酶活性检测(β-glucuronidase，GUS) | 第42-43页 |
| ·GUS的PCR检测 | 第42-43页 |
| ·GUS活性的定性检测 | 第43页 |
| ·GUS活性的定量检测 | 第43页 |
| ·DIG标记的PCR-Southern Blotting | 第43-45页 |
| 第三章 野苋菜凝集素基因的克隆 | 第45-60页 |
| ·材料与方法 | 第45-48页 |
| ·材料与试剂 | 第45页 |
| ·野苋菜凝集素基因(AVA)的克隆 | 第45-47页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第47页 |
| ·AVA基因和AVAc基因对烟草的遗传转化 | 第47页 |
| ·转基因植株的检测 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-59页 |
| ·野苋菜凝集素AVA核基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·AVA基因的序列分析 | 第49-50页 |
| ·AVA基因编码区序列的克隆 | 第50-51页 |
| ·AVAc基因分析 | 第51-55页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·转基因烟草植株的获得及检测 | 第56-58页 |
| ·转基因烟草对蚜虫生长发育的抑制作用 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 豌豆MAR的分离及其功能分析 | 第60-71页 |
| ·材料与方法 | 第60-61页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-68页 |
| ·MARs的克隆及序列分析 | 第61-64页 |
| ·植物表达载体的构建和烟草转化 | 第64-65页 |
| ·定性分析GUS的表达 | 第65-66页 |
| ·MARs对转基因表达的作用 | 第66-68页 |
| ·讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 MAR序列介导野苋菜凝集素基因在小白菜中的表达 | 第71-79页 |
| ·材料与方法 | 第71-73页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·植物组织培养基 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72页 |
| ·转基因植株的抗蚜性测定 | 第72-73页 |
| ·结果与分析 | 第73-76页 |
| ·顺向重复连接MAR的植物表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·白菜转化及再生植株的筛选 | 第74页 |
| ·白菜转化植株的分子检测 | 第74-76页 |
| ·转基因阳性植株的抗蚜分析 | 第76页 |
| ·讨论 | 第76-79页 |
| 第六章 杀虫融合基因的构建 | 第79-89页 |
| ·材料与方法 | 第80-81页 |
| ·菌株与质粒 | 第80页 |
| ·计算机软件和网络数据库 | 第80页 |
| ·融合基因的构建 | 第80-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-89页 |
| ·构建融合蛋白的可行性分析 | 第81-85页 |
| ·融合杀虫基因植物表达载体的构建 | 第85-87页 |
| ·融合基因植物表达载体的构建 | 第87-89页 |
| 第七章 融合杀虫基因对甘蔗的遗传转化 | 第89-95页 |
| ·材料和方法 | 第89-91页 |
| ·材料 | 第89-90页 |
| ·方法 | 第90-91页 |
| ·结果与分析 | 第91-93页 |
| ·甘蔗对Hyg的敏感性 | 第91页 |
| ·转化后的抗性筛选及抗性愈伤组织分化成苗 | 第91-92页 |
| ·转化植株PCR及Southern杂交检测 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| 第八章 结论与展望 | 第95-97页 |
| ·研究总结 | 第95-96页 |
| ·后续研究 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第110页 |
