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含硒谷胱甘肽硫转移酶的真核表达及抗氧化作用研究

中文摘要第1-8页
Abstract第8-11页
英文缩写词表第11-17页
第1章 绪论第17-56页
   ·硒蛋白的研究进展第17-35页
     ·硒蛋白的分类第17-21页
     ·硒蛋白与疾病的关系第21-22页
     ·硒蛋白的生物合成第22-28页
  参考文献第28-35页
   ·谷胱甘肽过氧化物酶第35-56页
     ·GPX 的分类第35-37页
     ·GPX 的结构特点第37-40页
     ·GPX 的催化机理第40-43页
     ·GPX 的生物学功能第43-44页
     ·GPX 的人工模拟第44-48页
  参考文献第48-56页
第2章 具有 GPX 活性的含硒谷胱甘肽硫转移酶的表达第56-68页
   ·实验材料第57-58页
     ·菌株和质粒第57页
     ·试剂第57页
     ·仪器第57-58页
   ·实验方法第58-60页
     ·定点突变第58页
     ·目的蛋白在细胞中的表达第58-60页
     ·目的蛋白的纯化第60页
     ·纯化产物的 Western blot 分析第60页
   ·实验结果与讨论第60-63页
     ·定点突变第60-61页
     ·ELISA 筛选结果第61-63页
   ·讨论第63-65页
     ·分泌表达第63-64页
     ·真核表达载体 pSelExpress1第64-65页
     ·表达量第65页
 参考文献第65-68页
第3章 seleno-hGSTZ1-1(Ser15Sec)的活性研究第68-82页
   ·实验材料第70页
     ·主要试剂第70页
     ·主要仪器第70页
   ·实验方法第70-71页
     ·GPX 酶活力测定第70页
     ·seleno-hGSTZ1-1(Ser15Sec)的最优 pH 及温度测定第70页
     ·动力学测定第70-71页
     ·统计学分析第71页
     ·同源建模的理论方法第71页
   ·结果第71-74页
     ·GPX 活力测定第71页
     ·最适温度及 pH 值检测第71-72页
     ·Seleno-hGSTZ1-1(Ser15Sec)的动力学研究第72-74页
   ·讨论第74-79页
 参考文献第79-82页
第4章 含硒谷胱甘肽硫转移酶的抗氧化作用第82-107页
   ·实验材料第83页
     ·试剂第83页
     ·主要仪器第83页
   ·实验方法第83-88页
     ·Se-hGSTZ1-1 的制备[13]第83-84页
     ·心肌细胞原代培养[13]第84页
     ·建立 H2O2诱导氧化应激损伤模型第84页
     ·Se-hGSTZ1-1 安全剂量的选择第84-85页
     ·MTT 法测定心肌细胞的存活率第85页
     ·实验分组第85-86页
     ·脂质过氧化产物丙二醛(Malondialdehyde, MDA)的含量测定第86页
     ·细胞胞浆酶—乳酸脱氢酶(LDH)含量测定第86页
     ·细胞超氧化物歧化酶(SOD)含量测定第86-87页
     ·细胞凋亡率检测第87页
     ·免疫印迹法检测各组细胞中 NF-κB、bcl-2、bax、PPAR-γ蛋白表达情况第87-88页
     ·统计学分析第88页
   ·GST 预保护作用实验结果第88-96页
     ·H2O2对大鼠乳鼠心肌细胞存活率的影响第88页
     ·Se-hGSTZ1-1 安全剂量的选择第88-89页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞存活率降低的影响第89-90页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 MDA 的影响第90-91页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 LDH 释放的影响第91页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 SOD 的影响第91-92页
     ·Se-hGSTZ1-1 对大鼠心肌细胞凋亡率的影响第92-93页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 NF-κB 的影响第93-94页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 bcl-2 的影响第94-95页
     ·e-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 PPAR-γ的影响第95页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 bax 的影响第95-96页
   ·GST 治疗作用实验结果第96-100页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 MDA 的影响第96-97页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 LDH 释放的影响第97页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 SOD 的影响第97-98页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 NF-κB 的影响第98-99页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 PPAR-γ的影响第99页
     ·Se-hGSTZ1-1 对 H2O2诱导的大鼠心肌细胞 bax 的影响第99-100页
   ·讨论第100-103页
     ·Se-hGSTZ1-1 具有 GPX 活性第100-101页
     ·氧化应激与细胞凋亡的关系第101页
     ·Se-hGSTZ1-1 抗氧化的可能分子机制第101-103页
 参考文献第103-107页
结论第107-108页
博士期间的科研成果第108-109页
致谢第109页

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