| 符号说明 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| ·植物对低温的应答 | 第12-17页 |
| ·抗氧化系统对低温逆境的响应 | 第13-14页 |
| ·植物细胞应对低温胁迫的渗透调节 | 第14-15页 |
| ·植物光合机构对低温胁迫的响应 | 第15页 |
| ·低温应答的基因调控 | 第15-17页 |
| ·有关CBF 基因家族 | 第17-22页 |
| ·植物 CBF 基因家族的发现 | 第17-18页 |
| ·植物CBF 的序列特征 | 第18-19页 |
| ·CBF 转录因子对COR 基因的表达调控 | 第19-20页 |
| ·植物CBF 冷应答通路 | 第20-22页 |
| ·启动子的类型 | 第22-24页 |
| ·组成型启动子 | 第22页 |
| ·诱导型启动子 | 第22-23页 |
| ·组织特异型启动子 | 第23-24页 |
| ·研究目的及存在的问题 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·实验材料与处理 | 第26页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·酶和生化试剂 | 第26页 |
| ·PCR 引物 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·总RNA 的提取 | 第26-28页 |
| ·PCR 扩增 | 第28页 |
| ·连接反应 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·转化及克隆筛选 | 第29页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第29-30页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·回收 | 第30页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·获得目的基因 | 第30页 |
| ·构建重组表达载体 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌BL21 原核表达的诱导 | 第31页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·原核表达马铃薯CBF3 重组蛋白抗体制备 | 第33页 |
| ·蛋白杂交分析 | 第33-34页 |
| ·植物总蛋白的提取 | 第33页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33页 |
| ·半干法蛋白转移 | 第33-34页 |
| ·封闭及杂交 | 第34页 |
| ·显色反应 | 第34页 |
| ·尿素-SDS-PAGE | 第34页 |
| ·农杆菌介导的马铃薯转化 | 第34-36页 |
| ·侵染用根癌农杆菌的制备 | 第34-35页 |
| ·马铃薯转化、再生体系的建立 | 第35页 |
| ·培养基配方 | 第35页 |
| ·马铃薯的栽培与繁种 | 第35页 |
| ·转基因马铃薯的鉴定 | 第35-36页 |
| ·生理指标的测定 | 第36-38页 |
| ·光合速率的测定 | 第36-37页 |
| ·调制式荧光仪荧光参数的测定 | 第37页 |
| ·快速叶绿素荧光诱导曲线的测定 | 第37页 |
| ·丙二醛含量和相对电导率的测定 | 第37页 |
| ·抗氧化酶活性测定 | 第37页 |
| ·叶片中叶绿素含量变化测定 | 第37-38页 |
| ·统计分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-60页 |
| ·马铃薯CBF3 基因原核表达 | 第39-41页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39页 |
| ·重组蛋白的表达及诱导条件的优化 | 第39-40页 |
| ·pET30a-CBF3 重组蛋白的亲和纯化及抗体的制备 | 第40-41页 |
| ·马铃薯转化及分子鉴定 | 第41-43页 |
| ·马铃薯转化 | 第41页 |
| ·转基因植株的分子鉴定 | 第41-43页 |
| ·短期低温处理条件下转基因植株的生理指标测定 | 第43-54页 |
| ·转CBF3 基因马铃薯外部形态的变化 | 第43-45页 |
| ·低温处理条件下转 CBF3 基因马铃薯叶片光合速率的变化 | 第45-46页 |
| ·低温处理对PSⅡ相关参数的影响 | 第46-50页 |
| ·低温处理对MDA 含量和电导率的影响 | 第50-51页 |
| ·低温处理对AtCBF3 转基因马铃薯的活性氧水平的影响 | 第51页 |
| ·低温处理对转CBF3 基因马铃薯抗氧化酶活性的影响 | 第51-52页 |
| ·低温处理对转CBF3 基因马铃薯卡尔文循环关键酶活性的影响 | 第52-54页 |
| ·低温胁迫对烟草叶片脯氨酸和可溶性糖含量的影响 | 第54页 |
| ·长期低温处理条件下转基因植株的生理指标测定 | 第54-58页 |
| ·低温处理条件下转CBF3 基因马铃薯叶片光合速率的变化 | 第54-56页 |
| ·低温处理对Fv/Fm 和ΦPSⅡ 的影响 | 第56-57页 |
| ·低温处理对转CBF3 基因马铃薯抗氧化酶活性的影响 | 第57-58页 |
| ·低温处理对CBF3 马铃薯植株中COR, CAT1, SOD, P5CS 和SuSy 表达情况的RT-PCR 分析 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
