| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一部分 利用酵母双杂交系统筛选与油菜ATP6基因相互作用的蛋白质 | 第14-37页 |
| 1 材料及来源 | 第14-22页 |
| ·菌株 | 第14页 |
| ·载体 | 第14-17页 |
| ·克隆载体 | 第14-16页 |
| ·对照载体 | 第16-17页 |
| ·生化试剂,酶制剂,试剂盒及仪器 | 第17页 |
| ·培养基及试剂配方 | 第17-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-31页 |
| ·Carrier DNA的制备 | 第22-23页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·采用ds cDNA,pGADT7-Rec转化AH109 | 第24页 |
| ·B-半乳糖昔酶(B-lacZ)活性检测 | 第24-25页 |
| ·无效AD质粒的去除 | 第25-26页 |
| ·酵母总DNA的提取 | 第26页 |
| ·PCR检测 | 第26-27页 |
| ·Taq Ⅰ,BsuR Ⅰ酶切,分组 | 第27-28页 |
| ·重复鉴定 | 第28-31页 |
| ·E.coli JM109感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·酵母DNA转化E.coli JM109感受态细胞 | 第29页 |
| ·阳性克隆的检测 | 第29-30页 |
| ·小量提取pGADT7-Rec-cDNA质粒 | 第30-31页 |
| ·pGADT7-Rec-cDNA质粒转回酵母 | 第31页 |
| ·测序及比对分析 | 第31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-35页 |
| ·第一次筛选分析 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增检测插入片段 | 第32-33页 |
| ·Taq Ⅰ,BsuR Ⅰ酶切,分组 | 第33页 |
| ·酵母总DNA转化E.coli | 第33-34页 |
| ·相互作用的分析 | 第34页 |
| ·测序及比对分析 | 第34-35页 |
| 4 小结与讨论 | 第35-37页 |
| 第二部分 基因的克隆 | 第37-79页 |
| 1 材料及来源 | 第37-41页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·载体 | 第37-39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·试剂配方 | 第40-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-61页 |
| ·通过cDNA末端快速扩增的方法扩增5′端cDNA | 第41-48页 |
| ·油菜84100-18幼叶RNA的提取 | 第41-42页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第42-43页 |
| ·cDNA的纯化 | 第43页 |
| ·cDNA末端加尾 | 第43-44页 |
| ·第一轮PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·第二轮PCR扩增 | 第45-46页 |
| ·PCR产物的回收 | 第46页 |
| ·E.coli JM109感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·回收片段连接pMD18-T载体 | 第47页 |
| ·重组质粒的转化 | 第47页 |
| ·阳性克隆的检测及测序 | 第47-48页 |
| ·利用Tail PCR方法扩增5’端未知序列 | 第48-55页 |
| ·油菜总DNA的提取 | 第48页 |
| ·第一次Tail PCR扩增5’端未知序列 | 第48-53页 |
| ·第二次Tail PCR扩增5’端未知序列 | 第53-55页 |
| ·基因全长cDNA的克隆 | 第55-57页 |
| ·基因扩增 | 第55-56页 |
| ·片段的回收,连接,转化 | 第56页 |
| ·阳性克隆的检测及测序 | 第56-57页 |
| ·反向真核表达载体的构建 | 第57-61页 |
| ·基因片段的扩增及酶切 | 第57-58页 |
| ·pSK中间载体质粒的提取及酶切 | 第58-59页 |
| ·pSK-目的基因中间载体的构建 | 第59-60页 |
| ·pCAMBIA2301G-目的基因载体的构建 | 第60-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-76页 |
| ·RACE的方法扩增5’端cDNA | 第61-62页 |
| ·第一次Tail PCR的方法扩增5’端序列 | 第62页 |
| ·第二次Tail PCR的方法扩增5’端序列 | 第62-63页 |
| ·基因全长的克隆 | 第63页 |
| ·基因的cDNA序列全长及推导的蛋白质序列 | 第63-65页 |
| ·蛋白质的序列分析和结构分析 | 第65-76页 |
| ·一级结构的分析 | 第65-66页 |
| ·蛋白质二级结构的分析 | 第66-67页 |
| ·序列的同源比对分析 | 第67-70页 |
| ·信号肽序列分析 | 第70-72页 |
| ·亚细胞位点分析 | 第72-73页 |
| ·跨膜区域的预测 | 第73-74页 |
| ·蛋白质三级结构的预测 | 第74页 |
| ·pSK目的基因质粒的酶切检测 | 第74-75页 |
| ·pCAMBIA2301G-目的基因质粒的酶切检测 | 第75-76页 |
| 4 小结与讨论 | 第76-79页 |
| 文献综述 | 第79-88页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
